β拉帕醌通过emt抑制乳腺癌侵袭转移的机制研究病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

延边大学博士学位论文摘要 延边大学博士学位论文 摘要 研究背景：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，也是世界女性癌症死亡的第二大 原因。NAD(P)H：醌氧化还原酶I(NQ01)蛋白又称醌氧化还原酶，不仅是一种黄素酶，也 是一种II相解毒酶，其发生缺陷后，与肿瘤发生的易感性密切相关。目前研究表明，NQ01 蛋白在恶性肿瘤中呈高表达，并与患者的不良预后密切相关。p．拉帕醌是一种放射增敏剂， 具有抗肿瘤的功效，可选择性杀伤NQ01过表达的实体肿瘤。然而，它是否具有抑制乳腺 癌转移的作用、其机制如何?尚不明确。 研究目的：探讨NQ01蛋白在转移性乳腺癌组织中过表达的临床病理学意义，并通 过体内外分子生物学实验探讨p．拉帕醌对的乳腺癌细胞生物学行为的影响，分析其抑制乳 腺癌细胞转移的作用及分子机制，为乳腺癌的靶向治疗提供可能的新靶点。 材料和方法：应用免疫组化方法在45例癌旁正常组织、176例乳腺癌组织中检测 NQ01蛋白的表达情况，并应用qRT-PCR和Western-blot法对比分析62例新鲜乳腺癌组 织和癌旁组织中NQ01的mRNA和蛋白表达情况，分析NQ01异常表达与转移性乳腺癌 之间的相关性。传代培养NQ01过表达的MDA．MB．23 1、MCF．7乳腺癌细胞株；噻唑蓝 (MTT)及平板克隆实验检测p．拉帕醌对细胞增殖的抑制作用；通过划痕实验、迁移实验、 侵袭小室实验检测p．拉帕醌抑制MDA-MB．231、MCF．7细胞迁移和侵袭的能力； Western-blot法检测p．拉帕醌对MDA-MB-231、MCF．7细胞NQOI蛋白和增殖、EMT标 志物及Akt／mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。体内实验部分：建立MDA．MB．231细 胞系裸鼠移植瘤模型，随机分成p．拉帕醌药物处理组及对照组。连续给药4周后检测p．拉 帕醌对MDA．MB．23 1移植瘤的抑制能力，并将瘤组织制成病理切片，应用免疫组化分析 Ki67、E-cadherin、p-Akt、p-S6及p-4EBP 1蛋白的表达情况。 Ⅲ 万方数据 延边大学博士学位论文结果：1．qRT．PCR和Western 延边大学博士学位论文 结果：1．qRT．PCR和Western blot法检测显示：62对乳腺癌新鲜组织qh NQ01的mRNA 和蛋白表达水平明显高于癌旁正常组织；且转移性乳腺癌组织中NQ01的mRNA和蛋白表 达水平显著高于非转移性乳腺癌组织；转移性乳腺癌细胞系中NQ01的mRNA和蛋白表达 水平也显著高于非转移性乳腺癌细胞系；免疫组化结果亦表明，乳腺癌组织中NQ01蛋白 表达阳性率和强阳性率(23％和62％)明显高于癌旁正常组织(20％和0．O％)(尸．0．05)； 2．MTT实验与平板克隆实验结果表I明：41xM的D．拉帕醌给药处理后MDA．MB-231、MCF-7 细胞的增殖能力明显下降(氏0．05)，Western blot结果显示：p-拉帕醌通过下调Skp2和 DEK蛋白的表达参与调节乳腺癌细胞的增殖。划痕实验、迁移实验、侵袭小室实验结果还 显示：4pM的p．拉帕醌可明显抑制MDA．MB．231、MCF．7细胞的迁移和侵袭能力(P0．05)， 而且Western blot和免疫荧光染色结果表明，D．拉帕醌主要通过下调迁移相关蛋白MMP一9 及上皮间质转化(EMT)间质标记物Snail、Vimentin、Twist、Slug等的表达水平、上调 EMT上皮标志物E．cadherin的表达影响MDA．MB．23 1、MCF．7细胞的迁移和侵袭能力；3． p．拉帕醌可下调MDA．MB．231、MCF．7细胞中Akt／mTOR相关信号通路蛋白p-AKT、p-S6 和p-4EBPl的表达、上调p-PTEN的表达。4．13-拉帕醌抑制MDA-MB-231细胞的裸鼠移植 瘤成瘤能力，且药物处理组肿瘤组织坏死增多，Ki67、p-Akt、p．S6及p-4EBPl表达均下调， 而上皮标记物E．cadherin蛋白表达上调。 结论：1．NQ01蛋白的表达水平与乳腺癌的转移密切相关；2．p．拉帕醌可通过下调 Skp2和DEK蛋白的表达抑制乳腺癌细胞的增殖；3．D．拉帕醌通过EIVlT途径抑制乳腺癌细 胞的侵袭和迁移能力；4．p．拉帕醌杀伤乳腺癌细胞可能是通过抑制Akt／mTOR通路实现的。 关键词：乳腺癌；NQ01；p．拉帕醌；上皮间质转化；转移 IV 万方数据 ABSTRACT ABSTRACT 延边大学博士学垡论文 ABSTRACT Background：Breast cancer is one of the most common malignancies in women worldwide and the second leading cause of ca