CRISPRCAS9慢病毒系统概述.pdfVIP

CRISPR/CAS9慢病毒系统 吉凯基因 CRISPR/CAS9系统原理 CRISPR/CAS9系统： 基因组定点切割系统。  定点：sgRNA ，碱基互补配对  切割：CAS9蛋白，核酸内切酶 让我们用心，换取您的放心！ CRISPR/CAS9系统原理  无模板  有模板 随机修复（NHEJ ） 重组修复(HDR) 读码框移位 精确插入碱基 蛋白无表达 Knock in Knock out  Gene knock out  Gene knock in 让我们用心，换取您的放心！ CRISPR/CAS9 VS RNAi-敲除效果 lentiCRISPRs abolished EGFP fluorescence in 93 ±8% of cells after 11 days. 参考文献：Science. 2014 Jan 3;343(6166):84-7. doi: 10.1126/science.1247005 Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout screening in human cells. CRISPR/CAS9 VS RNAi-靶点一致 靶点间一致的概率： CRISPR/CAS9：78 ±27% shRNA：20 ±12% 参考文献：Science. 2014 Jan 3;343(6166):84-7. doi: 10.1126/science.1247005 Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout screening in human cells. CRISPR/CAS9 VS RNAi-表型呈现 RNAi 敲减OK 无表型 CRISPR/CAS9 表型明显 参考文献：Science. 2014 Jan 3;343(6166):84-7. doi: 10.1126/science.1247005 Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout screening in human cells. CRISPR/CAS9 VS RNAi  与RNAi相比，CRISPR/CAS9在基因功能学研究中具有独到优势： 对比 RNAi CAS9 作用水平 mRNA水平 基因组水平 所有基因组序列，如外显子，内含 靶位点范围 仅转录本 子，启动子，增强子，基因间序列等 靶蛋白消除水平 不完全消除 完全消除 靶蛋白