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TLR4信号通路在脂多糖或鼠伤寒沙门氏菌诱导的雏鸡肝损伤中的作用目录 TLR4信号通路在脂多糖或鼠伤寒沙门氏菌诱导的雏鸡肝损伤中的作用 目录 摘要 i Abstract ． iv 缩略语表 ．．viii 1前言 l 1．1立题背景 1 1．2文献综述 2 1．2．1肝脏的免疫功能 2 1．2．1．1肝脏免疫的结构基础 2 1．2．1．2肝脏免疫微环境 3 1．2．1．3 TLRs与肝脏免疫 ．．5 1．2．2 TLR4信号通路简介 7 1．2．2．1 TLR4的发现 ．．7 1．2．2．2 TLR4的配体 ．．8 1．2．2．3 TLR4信号通路 ．．8 1．2．2．4 TLR4信号通路与肝损伤 ．．9 1．2．2．5 TLR4信号通路与肝再生 10 1．3选题目的与意义 ．11 2材料与方法 。12 2．1试验动物与器材 。12 2．1．1试验动物及处理 ．．12 2．1．2主要仪器 ．．12 2．1．3主要试剂 ．．13 2．1．4主要溶液和试剂的配制 ．．14 2．2试验方法 ．1 5 2．2．1样品采集与处理 ．．15 2．2．2石蜡切片制作 ．．15 T 万方数据 华中农业大学2016届硕士研究生学位论文2．2．3苏木精．伊红(髓)染色 华中农业大学2016届硕士研究生学位论文 2．2．3苏木精．伊红(髓)染色 16 2．2．4变色酸2R染色 16 2．2．5免疫组织化学染色 17 2．2．6细胞凋亡检测 17 2．2．7谷丙转氨酶活性检测 1 8 2．2．8 easpase-3活性检测 19 2．2．9 BCA法测定组织匀浆液的蛋白浓度 ．．20 2．2．10荧光定量PCR 21 2．2．10．1组织样总RNA的提取 ．21 2．2．10．2 RNA逆转录合成eDNA第一条链 22 2．2．10．3荧光定量PCR引物的合成 22 2．2．10．4荧光定量PCR分析 23 2．2．11数据统计分析 ．24 3结果 。25 3．1 LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激对肝脏组织结构的影响 ．．25 3．2 LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激后肝脏ALT活性的变化 27 3-3 LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激后肝脏炎性因子的表达变化 ．．28 3．4 LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激对肝细胞凋亡的影响 ．．30 3．4．1 LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激后肝脏caspase一3活性变化 ．．30 3．4．2 LPS刺激对肝细胞凋亡的影响 30 3．4．3 LPS刺激或鼠伤寒沙门刺激后肝脏caspase-3 caspase．8的表达变化 ．．32 3．5 LPS或鼠伤寒沙门氏茵刺激对肝细胞增殖的影响 ．．33 3．6 LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激后肝脏TLR4信号通路相关分子的表达变化 35 zI讨论 ．． ．． ．． ．．：；9 4．1 LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激对肝脏组织结构及ALT活性的影响 39 4．2 TLR4信号通路对LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激后肝脏炎性因子表达的影响 40 TT 万方数据 TLR4信号通路在脂多糖或鼠伤寒沙门氏菌诱导的雏鸡肝损伤中的作用4．3 TLR4信号通路在脂多糖或鼠伤寒沙门氏菌诱导的雏鸡肝损伤中的作用 4．3 TLR4信号通路对LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激后肝细胞凋亡的影响 一43 4．4 TLR4信号通路对LPS或鼠伤寒沙门氏菌刺激后肝细胞增殖的影响 ．．44 5结论 ． ． 。46 6本研究的创新之处 46 7本研究的不足之处 ．46 参考文献 ．47 至殳谢 。65 附录1个人简历 ．66 附录2论文发表情况 。67 III 万方数据 TLR4信号通路在脂多糖或鼠伤寒沙门氏菌诱导的雏鸡肝损伤中的作用摘要 TLR4信号通路在脂多糖或鼠伤寒沙门氏菌诱导的雏鸡肝损伤中的作用 摘要 Toll样受体(Toll．1ike receptors，TLRs)作为天然免疫中最为重要的一类模式识别 受体，能够特异性地识别病原微生物的保守结构一一病原相关分子模式 (pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)，从而激活下游信号通路，调节机体 的免疫应答。其中，TLR4广泛表达于肝脏实质及非实质细胞中，通过识别革兰氏阴 性菌细胞壁的主要构成分子脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)，对肝脏生理状态的维 持和病理过程的发展都起着至关重要的作用。有研究证实，LPS／TLR4信号通路参与 了多种肝脏疾病的发生与发展。然而，目前关于TLR4信号通路与肝损伤关系的研究 大都集中在哺乳动物上，且关于肝损伤后TLR4信号通路相关分子的动态变化鲜有报 道。为此，本研究拟以1日龄科宝肉鸡为研究对象，采用HE染色、变色