一种新型对虾素亚家族在日本对虾先天免疫中的功能研究生物工程专业论文.docxVIP

山东大学硕士学位论文2．5核酸及氨基酸序列的生物信息学分析 山东大学硕士学位论文 2．5核酸及氨基酸序列的生物信息学分析 ．．18 2．6 SDS．PAGE 1 8 2．7 Westem Blot．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．19 2．8液体抑菌实验 ．．1 9 2．9细菌结合实验 ．．19 2．10多糖结合实验 20 2．11细菌凝集实验 20 2．12 RNA干扰实验 20 2．13体内细菌清除实验 21 2．14吞噬实验 22 三、结果 22 1．MjPen—II全长eDNA克隆及序列比对 ．22 2．M)Pen．II的组织分布以及病原刺激后的表达模式 ．25 3．M)Pen—II的重组表达及抗体制备 27 4．MjPen—II的抑菌活性检测 ．28 5．MjPen．II的细菌凝集活性检测 ．30 6．M)Pen—II的细菌结合活性及多糖结合活性 ．31 7．MjPen．II的细菌清除实验 ，33 8．MjPen—II对吞噬作用的影响 ．35 9．MjPen—II对吞噬相关基因表达水平的影响 ．36 四、讨论 38 创新点总结 ．．41 参考文献 ．．43 致 谢 ．．49 在读期间发表文章 ．．51 万方数据 山东大学硕士学位论文一种新型对虾素亚家族在日本对虾先天免疫中的功能研究 山东大学硕士学位论文 一种新型对虾素亚家族在日本对虾先天免疫中的功能研究 摘 要 细菌及病毒等病原体的入侵为动物维持正常生理功能带来重大威胁。无脊椎 动物不像脊椎动物那样进化出了一套复杂而完备的自我防御系统，而是主要通过 先天免疫来抵御病原体侵害。抗菌肽(antimicrobial peptide，AMP)是先天免疫过 程中杀灭及清除病原体的重要作用因子。对虾素(Penaeidin)作为特异性存在于 对虾体内一类抗菌肽，不仅能够直接杀灭细菌或抑制其生长繁殖，还可以作为一 种调理因子在先天免疫中间接发挥作用。对虾素是对虾体内抗菌肽家族的重要成 员。迄今为止，已有五种类型的对虾素被鉴定，它们均由一个N端的脯氨酸富 集区和一个C端的半胱氨酸富集区组成，其半胱氨酸富集区含有的六个半胱氨 酸形成三个二硫键。在本研究中，在日本囊对虾体内发现了一种新型对虾素，其 全长序列除了含有一个脯氨酸富集区和一个半胱氨酸富集区(称为对虾素结构 域)外，其N．端还具有一个独特的丝氨酸富集区。由此，我们将全部对虾素分 为两个亚家族，所有已报道的对虾素被命名为I型亚家族(Pen—I)，只具有1个 对虾素结构域，包括5种对虾素类型；而我们发现的这种新型对虾素则被命名为 对虾素亚家族II(Pen．II)，含有丝氨酸富集区结构域和对虾素结构域。与Pen．I 主要分布在血细胞不同，日本囊对虾体内的这种II一型对虾素(MjPen．II)分布在 所检测的所有组织中，包括血细胞、肝胰腺、心脏、鳃、胃和小肠等。MjPen—II 对革兰氏阴性菌和阳性菌具有抑菌活性，其中的丝氨酸富集区也显示出一定的抑 菌活性。MjPen．II能通过结合肽聚糖、脂多糖和脂磷壁酸等多糖从而结合在细菌 表面，进而促进细菌凝集。丝氨酸富集区主要通过结合肽聚糖和脂磷壁酸结合细 菌，其本身并没有凝集活性，但能够显著增强MjPen．II全长的凝集活性，脯氨 酸富集区与半胱氨酸富集区相比具有更强的糖结合活性及细菌结合活性。此外， MjPen—II还被发现参与吞噬并提高吞噬率。因此，MjPen—II既能直接消灭细菌， 也能间接的通过吞噬作用清除细菌。 关键词：日本囊对虾，先天免疫，抗菌肽，对虾素，吞噬 万方数据 山东大学硕士学位论文Functional 山东大学硕士学位论文 Functional study on a new subfamily of penaeidin in the inuate lmmunity 0t Knruma shrimD Abstract Pathogens like bacteria and virus are great threaten for normal physiological function of animals．Invertebrates have not developed a complex self-defence system as vertebrates have．They defend against harmful bacteria and viruses through the innate immune system．Antimicrobial peptides(AMPs)play an important rol