肺炎克雷伯氏菌感染牛乳腺上皮细胞基因表达谱分析微生物学专业论文.docxVIP

肺炎克雷伯氏菌感染牛乳腺上皮身¨胞基凶表达谱分析原创性声明 肺炎克雷伯氏菌感染牛乳腺上皮身¨胞基凶表达谱分析 原创性声明 冬人声明：所警交的学位论j：(=是本人在导师的拯等下进程镌硪究工作及取得鹳研究峻臻。除本文{：：三 羟注明gi用的内容外，论文．申一i毫}禽其他人已经发袭或撰写过的研究成粜+也不笆禽为获褥盎羹直太兰赞 其他教育机构翡学位葳证书稀使用过的衬辩。垮我一弼工作的闷志x寸奉磷究所徽豹任何贡献鲍已在论义中 侉7弼确的淀明劳表示谢惑。 学位论文绛嚣签名： 翻竖 播母教师签名： 盈 在学期闻研究成果使用承诺书 奉学能论文绛卷完仝f解学校肖关僳尉、使用学位论文的翘定．郫：内锭古夫学有投褥擘豫论文的垒 豁内容或端分豫留，}向瞪客商荚极孝句、部门送交学位论文豹复印转移磁盘，允{≈：编入有关熬絮库送行检索， 也可以采用影印、缀印妓其缝复制手段保存、=}￡编学位论文．为保护学院和导师的知淡产教，箨青在学期 阔取得的研究成架属于内蒙吉大学e作者今后使用涉及在学联闻主要研究内容或确究成浆。须征褥内蒙蠢 大掌就读鹈鲻等姊的弼惫：蓉煳予发袭论文。敝权龋{蕾妊颈著名为内蘩商大学方霄投稿或公拜发表。 学艇论文佟纛签皂：豳坠 拯撂教师签名：乏施 ；{ 期：垫毪。生王宝 日 期：羔121竺：垒：盔 内蒙古大学硕士学位论文肺炎克雷伯氏菌感染牛乳腺上皮细胞 内蒙古大学硕士学位论文 肺炎克雷伯氏菌感染牛乳腺上皮细胞 基因表达谱分析 摘要 肺炎克雷伯氏菌乳腺炎发病机制复杂，深入了解肺炎克雷伯氏菌与牛乳腺 的相互作用及牛乳腺对肺炎克雷伯氏菌感染的免疫应答机制，是预防和控制肺 炎克雷伯氏菌乳腺炎发生的关键。牛乳腺上皮细胞是外来病原菌通过乳导管侵 入牛乳腺后最先接触的细胞，本论文采用一株急性牛乳腺炎分离的肺炎克雷伯 氏菌与体外乳汁分离法培养的牛乳腺上皮细胞相互作用，采用普通光镜、扫描 电子显微镜、透射电子显微镜观察了肺炎克雷伯氏菌与牛乳腺上皮细胞相互作 用后细胞的形态学变化；采用Hochest染色和流式细胞术观察肺炎克雷伯氏菌诱 导牛乳腺上皮细胞凋亡情况；用Real．time PCR检测感染肺炎克雷伯氏菌前后牛 乳腺上皮细胞NODl、NOD2、RIP2、TLR2、TLR4、TLR6、TLR9、IL．6、IL．8 细胞因子的表达情况，用Real．time PCR和ELISA检测IL．1p及TNF．0【的表达情 况；首次运用IlluminaJSolexa深度测序技术对肺炎克雷伯氏菌感染牛乳腺上皮 细胞的数字基因表达谱变化进行了分析；NODlsiRNA载体的构建进一步研究 NODl在牛乳腺上皮细胞抗肺炎克雷伯氏菌免疫中的作用。 结果： 1．证明了肺炎克雷伯氏菌可以粘附侵袭牛乳腺上皮细胞，且可以诱 导牛乳腺上皮细胞发生凋亡；2．牛乳腺上皮细胞感染肺炎克雷伯氏菌后NODl 信号转导通路被激活，促进了炎性因子的表达；3．首次完成了肺炎克雷伯氏菌感 肺炎觅面侗氏丽愿梁午孚L脲上反笃¨胞基凼表达请分析 肺炎觅面侗氏丽愿梁午孚L脲上反笃¨胞基凼表达请分析 染牛乳腺上皮细胞前后转录组测序，发现664个差异性表达基因，包括536个 上调基因和128个下调基因；对这些差异表达基因进行GO功能富集分析发现 最显著富集的细胞功能和细胞过程与氧化磷酸化的代谢过程有关；对这些差异 表达基因进行pathway富集分析，发现NOD样受体信号通路、凋亡通路和氧化 磷酸化通路显著性富集。本实验研究进一步阐明了肺炎克雷伯氏菌乳腺感染的 机制，为肺炎克雷伯氏菌乳腺炎治疗方案的开发提供了新的参考依据。 关键词：牛乳腺上皮细胞：肺炎克雷伯氏菌；深度测序：基因表达谱；NOD样 受体通路 内蒙古大学硕士学位论文GENE 内蒙古大学硕士学位论文 GENE EXPRESSION PROFILING OF BOVINE MAMMAI心 EPITHELIAL CELLS IN RESPONSE TO碰E雅匹乙乙彳眦(融幻抛4E INFECTION ABSTRACT The pathogenesis of persistent COW mastitis caused by Klebsiella pneumoniae is complex，depth understanding the interaction between Klebsiella pneumoniae and bovine mammary gland is the key to prevent and control the Klebsiella pneumoniae mastitis occursand mechanism．Pathogenic bacterium go through the milk ducts into the COW mam