雷公藤对itp患者t细胞亚群ido与与tts表达的影响临床检验诊断学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明： 广州中医药大学学位论文原创性声明 本人郑重声明： 所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工 作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均 已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者逝丛垄 同期： ≯嗲年印月)多同 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向 国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中 医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影 印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名毯!盐查：：论文导师签名 同期：，)口f岁年止月≥卵 摘 摘 要 背景： 免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia，ITP)是由于自身反应性T和 B淋巴细胞被血小板自身抗体激活，机体发生一系列免疫反应，导致体内血小板生成 减少，破坏增多的自身免疫性疾病。ITP患者具有皮下粘膜出血、骨髓巨核细胞增多 等临床特点，严重者还会导致内脏出血。雷公藤(Tripterygium wilfordii，TW)具 有免疫抑制效应，是临床常用的治疗自身免疫性疾病的一味具有抗炎、免疫抑制效应 的中药。吲哚胺2，3一双加氧酶(Indoleamine2，3-dioxygenase，IDO)通过介导色氨 酸沿犬尿氨酸的代谢途径来诱导和维持机体的外周免疫耐受。而色氨酰一tRNA合成酶 (Tryptophanyl—tRNAsynthetase，TTS)则是通过将色氨酸加载到它特异的tRNA上， 形成蛋白复合物拮抗IDO对色氨酸的消耗参与机体免疫反应。本研究通过观察临床 ITP患者使用雷公藤治疗的疗效，同时检测ITP患者雷公藤治疗前后T细胞中IDO与 TTS表达的情况，了解雷公藤对ITP患者IDO／TTS介导的色氨酸代谢途径的影响。 目的： 1．观察ITP患者使用雷公藤的疗效； 2．检测雷公藤使用前后，ITP患者T细胞中IDO与TTS表达的变化情况，了解雷 公藤对ITP患者IDO／TTS介导的色氨酸代谢途径的影响； 3．通过检测雷公藤与地塞米松分别刺激ITP患者PBMCs细胞后，患者T细胞IDO 与TTS表达的变化情况，进一步验证雷公藤、地塞米松对ITP患者IDO／TTS介导的色 氨酸代谢途径的影响。 方法： 1．研究对象的纳入：临床收治初诊或复发的ITP患者25例，排除糖尿病、结核、 肝炎、消化道溃疡、高血压等疾病。抽血前至少30天未使用免疫抑制剂治疗。纳入 对象均采用雷公藤多甙片每日按每千克体重1～1．5mg的剂量进行治疗。在治疗前及 治疗后第5天抽取患者肝素抗凝全血标本。选取健康人25例为正常对照组，均不做 任何治疗处理。 2．单个核细胞的分离与培养：采集患者和健康对照人群的肝素抗凝血标本lOml， 用淋巴细胞分离液梯度分离单个核细胞，吸取中间白膜层细胞，用PBS洗涤两次后， 调整细胞浓度至5×106／ml，用配制好的改良型1640培养基进行培养，并分别用2nM 的雷公藤溶液和luM的地塞米松溶液与单个核细胞共同培养12个小时。 3．流式细胞术(FCM)检测PBMCs坏死率：收集培养12小时后的细胞，将细胞 浓度调整为5×10。个／ml。每管加碘化丙啶(Propidium，PI)5ul，室温避光孵育15min 后上机检测。 4．检测IDO与TTS的表达：表染CD4、CD8抗体，破膜后胞内染IDO与TTS抗体 后，上机检测CD4+ 后，上机检测CD4+与CD8‘细胞中IDO与TTS表达的变化情况。同时用RT-PCR检测IDO、 TTS mRNA的表达。 结果： 1．雷公藤治疗ITP患者临床有效率为80％。 2．FCM检测雷公藤治疗前后ITP患者T细胞中IDO与TTS的表达结果：与正常对 照组相比，ITP患者CD4+与CD8+细胞中IDO的表达量降低，而TTS的表达量则明显增 加，差异有统计学意义(PO．05)。有效组治疗后，患者CD4+与CD8+细胞中IDO的表 达量与治疗前相比明显上升，TTS的表达量则明显下降，差异有统计学意义(P0．05)。 但在治疗无效组中，患者CD4+与CD8+细胞中IDO与TTS的表达量与治疗前相比均无明 显差异(P0．05)。 3．RT—PCR检测雷公藤治疗前后IDO和TTS mRNA的表达结果：有效组治疗前PBMCs 的IDO mR．NA的表达量较正常对照组低，而TTS mRNA表达量较正常对照组高，差