第八章 高效液相色谱补充内容.ppt

密封圈老化、磨碎，导致漏液 检测器的维护一 氘灯（寿命2000h左右，价格5000-6000元） 不宜频繁开关 开+关=4小时 需要用时才开，不使用时最好关闭 冲柱（平衡或冲洗）时可以不接检测器 一是节省灯的使用，二是防止污染检测器 多数仪器的检测器电源开关在开机时就已打开，但灯的开关并没有开。 检测器的维护二 不用时充满有机流动相，如甲醇，乙腈等。 长时间未用在开始使用时检测器内可能会有气泡，现象是检测信号呈锯齿状剧烈大幅度波动，解决方法是快速堵住和放开检测器的出液口，堵住时使其内部压力瞬间增大放开后气泡会被冲出。 检测器（连有进出液两管）被堵，先检查是否是进液管被堵（多数情况下它被堵），用小流速倒冲，出液管连接泵。 色谱柱的维护 色谱柱的保存参考购买色谱柱的说明书，一般反相色谱柱（C18，C8等）用色谱纯甲醇或乙腈充满后用堵头密封两头冰箱内保存。 色谱柱在开始使用时（或使用完毕时），用洗脱能力强的流动相冲洗，除去上次使用时（或本次使用时）残留在固定相上的样品污染物等。 色谱柱冲洗过程中最好不接检测器，防止污染了检测器。 色谱柱使用多次后（出现柱压高、柱效低等）参考说明书冲洗再生。 色谱柱的正确连接 尽量减小缝隙，以减小死体积，减小色谱峰的展宽 流动相中有机组分 含量高时 流动相中有机组分 含量低时 如何查阅色谱柱的产品说明书 主要依据色谱柱填料参数 色谱柱参数 基质类型 粒径大小 孔径大小 碳含量高低 封尾类型 色谱柱内径 色谱柱长度 超高效液相色谱UPLC UPLC和快速液相色谱 仪器方面代表性的是自2004年Waters公司推出Aquity UPLC以来，超高效液相色谱一直震动着液相色谱市场的脉搏。2006年，Agilent 1200推出了具有更高耐压限和灵活性的高分离度快速液相色谱系统（RRLC）。 色谱柱方面在市场上出现了不同规格、不同品牌的亚2μm的色谱柱，以及性能和工作范围各不相同的超高效液相色谱产品。 使用亚2微米粒径的色谱柱，用Agilent 1200系列高分离度快速液相色谱（RRLC）系统进行快速和超快速分析 UPLC 超高效液相色谱（Ultra Performance Liquid Chromatography\ UPLC）是分离科学中的一个全新类别，UPLC借助于HPLC（高效液相色法）的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。超高效液相色谱是一个新兴的领域，作为世界第一个商品化UPLC产品的Waters ACQUITY UPLCTM 超高效液相色谱系统在1996年问世，之后像安捷伦、岛津等公司也陆续开始生产超高效色谱仪。目前，超高效液相色谱仪已经开始逐渐地投入液相实验中。 Agilent 1290 液相色谱系统 UPLC的原理与HPLC基本相同，所改变的地方主要有以下几点： 小颗粒、高性能微粒固定相的出现。HPLC色谱柱，例如常见的十八烷基硅胶键合柱，它的粒径是5um，而UPLC的色谱柱，会达到3.5um，甚至1.7um，具有更高柱效，更加利于物质分离。 超高压输液泵的使用。由于使用的色谱柱粒径减小，使用时所产生的压力也自然成倍增大。故液相色谱的输液泵也相应改变成超高压的输液泵。 高速采样速度的灵敏检测器。 与传统的HPLC相比，UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍，它缩短了分析时间，同时减少了溶剂用量降低了分析成本。 第八章 HPLC的补充内容 液相色谱键合相的类型和色谱性质的主要影响因素 高效液相色谱键合固定相的类型 主要有四类： 硅-氧-碳键型固定相 硅-氮-碳键型固定相 硅-氧-硅-碳键型固定相 硅-碳键型固定相 1、硅-氧-碳键型固定相 制备方法之一： 高压、过量醇、280度条件下与硅胶的硅羟基发生反应。 制备方法之二： 亚硫酰氯处理硅胶获得表面氯化硅胶，再与过量醇进行醇解反应。 缺点：容易被水解 2、硅-氮-碳键型固定相 制备方法： 先将硅胶表面氯化，再使伯胺与氯化硅胶反应。 对有机溶剂和pH=3-8的水介质稳定。 3、硅-氧-硅-碳键型固定相 制备方法： 硅胶表面的硅羟基与有机氯硅烷或有机硅氧烷进行硅烷化反应 。 对有机溶剂和pH=2-8.5的水介质是稳定的。 4、硅-碳键型固定相 制备方法： 氯化硅胶和有机锂或格氏试剂反应。 稳定性优于硅-氧-碳键型固定相，但生成的产物覆盖度较低。 键合固定相的性质 1、表面覆盖度 完全水解的硅胶表面有8umol/m2硅羟基，由于位阻的存在只有约一半的硅羟基可以进行反应。 好的填料要把残余硅羟基掩蔽起来，利用掩蔽试剂与参