tipe1通过调控emt抑制胃癌的侵袭和转移药理学专业论文.docxVIP

CoNTENTSChillese CoNTENTS Chillese Abstract 1 English Abstract ．4 Abbreviations ．．8 Text ．．10 Introduction ．．10 Materials 一14 Methods 21 Results ．．36 Discussions ．52 Conclusions 55 Ref．erences ．．56 Acknowledgemem ～63 Publications ．．64 万方数据 山东大学硕士学位论文TIPEl通过调控EMT抑制胃癌的侵袭和转移 山东大学硕士学位论文 TIPEl通过调控EMT抑制胃癌的侵袭和转移 硕士研究生：刘文文 专业：药理学 指导教师：张艳副教授 中文摘要 目的： 胃癌(gastric carcinoma，GC)在全世界范围内都有着较高的发病率和致死率。 我国的胃癌发病率已经跃居世界首位，占全世界胃癌发病率的42％。由于胃癌具 有“发病率高、转移率高、病死率高”、“早期诊断率低、手术根治率低和5年生 存率低”的“三高、三低”的特点，所以探索关键的胃癌标志物以实现胃癌的早期 临床诊断，从而进一步发现胃癌治疗的潜在靶点用于胃癌的治疗，是胃癌研究领 域近些年最大的热点也是设计本课题的临床意义所在。 胃癌最大的特点是早期易发生组织和腹腔的转移，也是影响胃癌预后的主要 因素，因此研究胃癌转移的机制，找到关键的靶基因是胃癌研究中迫切需要解决 的问题。本课题主要研究的基因TIPEl(tumornecrosis factor旺．induced protein 8．1ike 1，TNFAJP8L1)是TNFAIP8(tumor necrosis factor 0【．induced proteill8，肿瘤 坏死因子0【．诱导蛋白8)家族中的一员，该家族目前为止发现了TIPEl、TIPE2、 TIPE3和TNFmP8四个成员，这四个成员高度同源且其中TIPEl和TIPE2的同 源性达到了86％。研究表明TNFmP8家族与细胞凋亡、细胞间的信号转导以及 肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移密切相关，其中TIPE2是在2008年发现的免疫负 调控因子，也是目前该家族中研究最热的分子。已经有充分的证据表明TIPE2 能够显著抑制由Ras介导的肿瘤发生和侵袭转移，基于TIPEl和TIPE2的高度 同源性，我们推测TIPEl在肿瘤的发生发展中的也发挥了重要的作用。本课题 拟通过临床胃癌标本、胃癌细胞系和裸鼠转移模型三个方面对TIPEl在胃癌侵 袭和转移中发挥的作用及机制进行深入的探究，完善胃癌发生转移的机制，用于 胃癌的临床诊断和治疗。 万方数据 山东大学硕士学位论文方法： 山东大学硕士学位论文 方法： 1．检测临床胃癌标本中TIPEl的表达变化 1．1收集100例胃癌和癌旁组织，通过实时定量RT-PCR和免疫组化(IHC) 的方法检测TIPEl在胃癌组织中的表达变化情况。 1．2查阅100例临床胃癌患者的病理资料，统计分析TIPEl表达与临床资料 如病理分期以及组织和淋巴转移情况间的相关性。 2．探究TIPEl在胃癌发生发展中的作用及机制 2．1本实验选用SGc7901、BGc823、AGs三种常见胃癌细胞系作为研究对 象。构建稳定过表达TIPEl的慢病毒和基因沉默TIPEl的RNAi用于转染细胞。 2．2体外实验：通过划痕、TraJlswell模拟胃癌侵袭转移模型，观察过表达 TIPEl以后胃癌细胞侵袭和迁移能力的变化。 2．3体内实验：选取5．6周龄的雄性裸鼠随机分为实验组和对照组，尾静脉 注射稳定过表达TIPEl的胃癌细胞系SGC7901、BGC823建立体内转移模型。 一个半月后取材，通过苦味酸染色、HE染色观察过表达TIPEl对胃癌细胞体内 转移的影响。 2．4通过实时定量R■PCR、Westem blot以及免疫荧光的方法检测过表达 TIPEl或沉默TIPEl后EMT相关蛋白E．cadheriIl、Villlentill、Slug、Snail、T、)vist 以及MMP2、MMP9和B．catellin的表达变化情况。 结果： 1．相比于癌旁组织TIPEl在胃癌组织中的表达显著降低 mRNA(实时定量RT-PCR)和蛋白检测结果(IHC)显示，相对于正常癌 旁组织，胃癌组织中的TIPEl表达量显著降低，并且这种降低趋势与胃癌的分 化程度、局域淋巴结的转移情况密切相关，即随着胃癌分化程度的降低，TIPEl 的表达也随之进一步降低，在发生远处转移时TIPEl的表达最低。 2．过表达TlPEl能够显著抑制胃癌细胞的转移和侵袭 2．1用稳定过表达TIPEl的细胞系SGC7901和BGC823进行划痕实验，观 察0h，6h，12h和24h迁移距