单纯常染色体显性遗传性白内障致病基因的定位及突变研究眼科学专业论文.docxVIP

·英文缩略语·9 ·英文缩略语· 9 中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工 中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同 工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并 表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名： 劾事 日期： 兰：!兰§二墨 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，黪：研究 生在攻读学位期间论文王作的知识产权单位属中国医科大学。本人保 证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科 大学，且导师力通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学 校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许 论文被查阅和借阚。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密 内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。 论文作者签名： 瓤分 指导教师签名： 基 期： ≥扩形砻f翟 ·中文论著摘要·单纯常染色体显性遗传性白内障致病 ·中文论著摘要· 单纯常染色体显性遗传性白内障致病 基因的定位及突变研究 目 的 先天性白内障是儿童常见的致富性眼病，全世界有近4000万儿童患先天性白 内障，其中有1／3是遗传性先天性幺内障。遗传性囱内障有常染色体显性遗传、稳 性遗传和性连锁遗传。常染色体显性遗传性先天性白内障(Autosomal dominant congenital cataract，简称ADCC)是遗传性白内障中最常见的类型。ADCC随着致 病基因代代相传，对患者家系蜃代的生活和健康危害巨大，也给社会带来负担。 4如何降低或消除先天遗传性疾病是提高我国人口健康状况的关键问题之一。我国 是人口大国，充分利用我国人类基因组和遗传资源的优势，发现新的白内障致病 基因，找到其突变毅律和特点，并雳于产前基因筛查、基因诊断和遗传咨询，将 有效地预防先天性自内障患儿的出生，从而使遗传性白内障家族成员从视觉残疾 的困境中走出来，并可以与健康人、与社会和谐共处。在分子水平上揭示遗传性 毒内障及ADCC基因缺陷的本质，将为遗传干预和基因治疗提供理论依据。本文 就我们收集的生活在我园东北辽宁地区的四代10人患病的大家系，就遗传健白内 障发病的相关基因，进行了一系列的分子遗传学研究。 材料与方法 家系收集，直接调查我们收治的ADCC家系4个，排除眼部和全身其他遗传 性疾病，对其所有家系成员眼前节散瞳检查拍照，黉对患病成员做表型认定，绘 翻系谱图。经知情同意蔟，采集先涯者及家系成员外周盘4ml，一70℃冷冻保存备 用。酚氯仿法提取家系成员外周血基因组DNA，在染色体上的lq21．25、2q33．36、 3q21—25、3q27。3、10q25、l l唾22。l一23．21、12q13—14、13q12．1 l、16q23．1、16q22．1、 17qll-12、19q13。33、20p12．1、21q22．3、22q11．2—12．1区段内分别选取26个多态 性微卫星标记进行连锁分析。透过含7 性微卫星标记进行连锁分析。透过含7 moI／L尿素的8％聚丙烯酰胺变性凝胶电泳 分离PCR等镜片段， 硝酸银染色显色，根据凝胶上DNA片段大小确定微卫星标 记等位基因及家系中各成员的基因型。 应用LINKAGE软件(version 5．2)qh的 MLINK进行微卫星标记与该家系致病位点的两点间连锁分析，计算LOD值。判 断标准：Lod值／3，两个位点肯定连锁；Lod值≤．2，两个位点不连锁；．2Lod 值3，提示连锁。 根据个体的等位基因型，家系成员间的亲缘关系及孟德尔遗 传定律，人工构建该家系单体型。 逶过国际互联网，在美国国立图书馆数据库(网址：www．ncbi。him。nih．gov) 下载人类基因组中GJA8基因的全部钋显子标准序列。根据基因的结构，将预扩增 的DNA序列向两端延伸100bp左右，根据引物设计原则进行引物设计并合成。以 先证者和家系中一名正常人的基因组DNA为模板，以引物对GJA8F／GJA8R扩增 GJAB基因的外显子。PCR产物纯化后回收，纯化后的PCR产物25“1，每个测序 反应提供10 lamol／L的弓i物8～lO pl，测序过程由奥科生物有限公司完成，使用美 国ABI PRISMTM 377XL DNA自动测序仪，应用双脱氧末端终止法进行序列分析。 根据片段长度决定测序反应的个数，小于500 bp测一个