悬浮聚合聚丙烯酰胺载体固定化酶特性的研究121.docVIP

悬浮聚合聚丙烯酰胺固定化酶特性的研究 龚伟中宀魏甲乾2 （1.中国科学院兰州化学物理研究所，卄肃兰州730000, 2.甘肃省科学院生物研究所，卄肃兰州730000） 接要：本研究以悬浮聚合聚丙烯酰胺为载体材料，采用包埋一交联法固定化葡萄糖淀粉酶，并对其特性 进行了研究。实验衣明丙烯酰胺悬浮聚合固定化糖化酚的方法是简便可行的。 关键词：聚内烯酰胺固定化葡萄糖淀粉郦包埋一交联法 Study of Glucoamylase immobilized on polyacrylamide gel using suspensionpolymerization and its specialityGONG Wei-Zhong1*2 WEI Jia-Qian2 ^.Institute of Chemist^ and Physics,Chinese Academy of Sciences, Ixinzhou 730000「 （2.1nstitute of Biology,Gansu Academy oj Sciences, Lanzhou 730000 ）2 Abstract : In this paper,Glucoamylase immobilized onto polyacrylamide gel using entrapment-crosslinking through suspension polymerization,and we study the speciality of immobilized Glucoamylase.Result showed that the immobilized enzyme method is very simply and feasible. Key word： polyacrylamide geb immobilized Glucoamylase, entrapment-crosslinking 0引言： 近年来对固定化酶技术研究很多，并已取得长足的进步，先后开发了许多固定化方法和性能多样 的材料IT,但是真正投入工业化应用的固定化酶不多，主要原因是固定化成本高、效率低，稳定性相 对较差，因此，必须开发出更简便更实川的固定化方法以及新型的功能性材料，以拓展固定化酶制剂 在多种工业生产中的应用。聚丙烯酰胺载体无毒无味，耐酸碱，强度好，通过廉价易得的内烯酰胺悬 浮聚合[4-5],町得到颗粒状很细的聚丙烯酰胺载体颗粒，经过包埋-交联法固定化酶，有利于提高固 定化酶活性和稳定性。本文就悬浮聚合聚丙烯酰胺固定化匍萄糖淀粉酶的特性进行了探讨研究,以期 为该酶在淀粉工业中应用作初步尝试。 1.实验部分 1. 1材料： 丙烯酰胺（CP,屮国医药集团上海化学试剂公司），N, N亚甲基双丙烯酰胺（CP,屮国医药集 团上海化学试剂公司），过硫酸钾（AP,北京化工厂），三氯卬烷（AP,天津化学试剂冇限公司），甲苯 （AP,天津化学试剂有限公司），二甲氨基丙睛（实验试剂，上海试剂三厂），碳酸氢钠（AP,北京化 学试剂公司），戊二醛溶液（牛化试剂，天津市医药公司），具它试剂均为分析纯和化学纯。 1.2仪器： 水浴锅，砂心漏斗，搅拌装置一套（搅拌棒、温度计、铁架台等）等 1.3方法： 1.3.1糖化酶的固定化：分别取甲苯290ml,氯仿110ml置于500ml容瓶中（甲苯:氯仿290:110）, 将一定量的糖化他溶解在PH4.6的缓冲液中，以4层纱布过滤到小烧杯中，同时，将一定量的丙烯酰 胺溶解在缓冲溶液屮，再将一定量N, N亚甲基双丙烯酰胺溶解在缓冲溶液屮（稍加热10多分钟）， 然后将三者混合，分别在混合液屮加入二氨基丙靖和过硫酸钾，-?起装入带搅拌器的三颈瓶中，在 20-40°C的水浴中反应1小时，同时向三颈瓶中通入一定压强的2作为保护气，结束后将固定化糖化 酶分别川缓冲溶液，碳酸氢钠溶液洗涤，再川戊二醛溶液交联处理，充分洗涤后置于冰箱屮备丿II。 1.3.2酶活测定 2. 1酶活的定义：lg固体酶于40C, pH4.6的条件下，lh分解淀粉产生lmg葡萄糖,即为1个 酶活单位，以u/g或u/ml表示。 2.2糖化酶活力的测定：见文献［4］。 2.3固定化糖化酶活力测定：准确称取lg周定化糖化酶干载体颗粒于40°C, pH4.6的条件下， lh分解可溶性淀粉产生lmg葡萄糖，即为1个酶活单位，以u/g?gel表示 2.结果与讨论: 2.1固定化糖化酶的制备 2.1. 1给酶量对固定化酶活力的影响 在合成载体的材料的量一定的条件下，对不同量的糖化酶进行固定，通过实验发现当加入酶的量 为lg时，得到的固定化酚酶活凹收率较高。见表1 2.1.2交联剂对固定化酶活力的影响 戊二醛含冇2个醛基，能够与酶分了Z间形成共价键，