梅毒螺旋体TpN17与TpN47表位肽融合抗原的重组表达及其酶联免疫.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2009, August 25; 25(8): 1187-1194 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 医学与免疫生物技术 TpN17 TpN47 1 1 1 2 3 孙爱华 , 范兴丽 , 沈香娣 , 汤仁仙 , 严杰 1 , 310053 2 , 221002 3 , 310058 : 以重组TpNs 为抗原的ELISAs 已被证明是具有较高敏感性和特异性的梅毒血清学检测方法, 若ELISAs 使用多 种 TpNs 抗原, 可进一步提高检测敏感性和特异性。根据抗原表位分析结果, 本研究首先采用连接引物 PCR 获得了 TpN17 和 TpN47 抗原表位序列融合成的人工基因片段tpE17-47, 然后构建了全长tpN17 、tpN47 基因以及 tpE17-47 融 合基因的原核表达系统。SDS和BioRad 凝胶图象分析系统检查结果显示, 所构建的原核表达系统能稳定表达目 的重组蛋白rTpN17 、rTpN47 和rTpE17-47, 其产量分别约占细菌总蛋白的 36% 、20%和28% 。采用Ni-NTA 亲和层析 法提纯的rTpN17 、rTpN47 和rTpE17-47 蛋白经 SDS分析, 均显示为单一的蛋白条带。Western blotting 结果表明, rTpN17 、rTpN47 和 rTpE17-47 蛋白均可被梅毒抗体阳性的病人血清所识别。以 rTpE17-47 为包被抗原的 rTpE17-47-ELISA 检测630 例临床确诊梅毒患者血清标本的阳性率为98.6%, 仅略高于TPPA(97.9%)(P0.05), 但明显高 于rTpN17-ELISA(83.8%) 、rTpN47-ELISA(83.3%)和 RPR(72.1%)(P0.01) 。上述ELISAs 和 TPPA 对 25 例 SLE 、36 例 RA 患者和250 例健康体检者的血清标本检测结果均为阴性, 但RPR 分别有 1、2 和2 例标本检测结果为阳性。本试验 成功地构建了rTpE17-47 抗原表位融合基因及其高效原核表达系统, 所建立的rTpE17-47-ELISA 可作为一种快速、简便、 安全、敏感和特异的梅毒血清学筛查或诊断新方法。 : 梅毒螺旋体, 抗原表位, 融合基因, 重组表达, 酶联免疫吸附试验 Recombinant expression of the fusion antigen based on Treponema pallidum TpN17 and TpN47 epitope peptides and establishment and application of the associated ELISA 1 1 1 2 3 Aihua Sun , Xingli Fan , Xiangdi Shen , Renxian Tang , and Jie Yan