铬耐受还原菌的多样性调研环境科学专业论文.docxVIP

本论文承 本论文承 国家自然科学基金21137003) 973课题(2014CB441 103) 浙江省自然科学基金(LY 基金 资助 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 致谢 致谢 光阴荏苒，硕士研究生的学-7即将结束，回首三午的学习生活使我受益匪浅。 从研究课题的选题、实验设计到论文的写作与修改，我得到了许多良师益友的关 怀与帮助，在这里向他们表达我最诚挚的敬意。 首先，衷心感谢我的导师黄益丽老师，从论文的选题到写作，黄老师一直给 予我悉心的指导与无私的帮助。黄老师严肃的科学态度，坚韧的探索精神和一丝 不苟的工作作风，深深地激励着我。黄老师不仅在科研上给予我精心的指导，同 时在生活上对我关怀备至，爱护有加。黄老师对我的关心和教诲我将永远铭记! 其次，衷心感谢课题组的朱利中教授、陈宝梁教授、林道辉教授、杨坤教授、 沈学优教授、周文军副教授、高超超副教授的指导与帮助!感谢实验室的同学们 在科研生活中给予了我极大的鼓励与支持! 最后，衷心感谢我的家人和朋友对我工作的大力支持，感谢他们对我生活无 微不至的关怀和照顾! 冯溟敬上 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 摘要 摘要 本研究通过基因挖掘法、培养法和文献调研，分别搜索分析了铬耐受菌、铬 还原菌和铬耐受还原菌多样性，为铬污染环境修复提供微生物资源。 (1)铬耐受菌的多样性研究。将长链chrA基因选作铬耐受机制的代表基 因在JGI基因组数据库(JGI Genome database)中调查铬耐受菌的多样性。基因 的调查以种为单位，在JGI Genome database中共有7887条不同菌种的基因组数 据，其中1887个菌种携带长链chrA基因。这1887株菌分布于21个不同的菌门， 39个纲，74个目，172个科和620属。其中变形菌门(Proteobacteria)包含的菌 株最多(1091株)，其次为厚壁菌门(Firmicutes，237株)，拟杆菌门(Bacteroidetes， 181株)和放线菌门(Actinobacteria，174株)。在属水平上，假单胞菌属 (Pseudomonas)包含的菌株最多(49株)，其次为芽孢杆菌属(Bacillus，46 株)和弧菌属(Fibrio，43株)。通过培养法，从西溪湿地土壤中直接筛选到9 株六价铬耐受菌，其中4株属于放线菌门(Actinobacteria)，3株属于变形菌门 (Proteobacteria)，2株属于厚壁菌门(Firmicutes)。这9株菌中，菌株GL02 属于乳球菌属(Lactococcus)，该属细菌未报导过具有铬耐受能力。另外，对西 溪湿地土壤中分离到的三株新菌种进行六价铬耐受能力测定，发现一株细菌$31 对Cr(VI)具有弱抗性，能够耐受10 mg·L’1的K2Cr207。通过菌种分类鉴定，根 据$31T的表性特征、生理生化特征等确定$31T属于Epilithonimonas，并将其命 名为Epilithonimonas xixisoli。 (2)铬还原菌的多样性研究。将铬还原酶(Cr(VI)reductase)基因选作铬 还原机制的代表基因在JGI基因组数据库(JGI Genome database)中调查铬还原 菌的多样性。基因的调查以种为单位，在JGI Genome database中共有7887条不 同菌种的基因组数据，其中81个菌种携带Cr(VI)reductase基因。这81株细菌 来自4个不同的菌门，其中51株属于变形菌门(Proteobacteria)，23株属于厚 壁菌门(Firmicutes)，6株属于放线菌门(Actinobacteria)，1株属于拟杆菌门 (Bacteroidetes)；在属水平上，双歧杆菌属(Bifidobacterium，5株)，博德特 氏菌属(Bordetella，5株)和芽孢杆菌属(Bacillus，5株)是菌株数目最多的 三个属。 II 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 摘要 (3)铬耐受还原菌的多样性研究。综合在JGI Genome database中铬耐受菌 和铬还原菌的调查结果，仅有36株细菌同时携带长链chrA基因和 Cr(VI)reductase基因。这36株细菌分属于3个门30个属，其中博德特氏菌属 (Bordetella，4株)包含的菌株数目最多。结合文献调研中所有已筛选到的铬耐 受还原菌属及本次在JGI基因组数据库中的调查结果，共有69个细菌菌属同时 具有耐受和还原六价铬的能力。这69个菌属分布于5个不同的茵门，9个纲， 27个目和46个科；其中变形菌门(Proteobacteria)包含的菌属最多(39个属)。 通过培养法