xbfd诱导h22荷瘤小鼠颗粒酶穿孔素凋亡途径的分子机制研究方剂学专业论文.docxVIP

贵阳中医学院硕士学位论文2．6眦染色 贵阳中医学院硕士学位论文 2．6眦染色 ．23 2．7 TUNEL染色 24 2．8 IHC 24 3．图像分析与数据统计 。24 4．实验结果 25 4．1 XBFD对H22荷瘤小鼠一般状况的观察 ．25 4．2 XBFD对血清中TNF-帕t，几-2含量的影响 ．26 4-3 XBFD对移植瘤中颗粒酶，穿孔素基因表达的影响 ．27 4．4 XBFD对病理形态学观察的影响 ．27 4．5 XBFD对移植瘤细胞凋亡影响 ．．．． ．27 4．6 XBFD对移植瘤中颗粒酶，穿孔素蛋白表达的影响 ．28 4．7 XBFD对移植瘤中Bax，BCL-2蛋白表达的影响 。28 第三部分分析讨论 ．30 1．本实验细胞凋亡相关因子探讨 30 2．本实验相关材料探讨 32 3．实验方法和结果的分析 33 3．1荷瘤小鼠生长情况的观察 ．33 3．2 ELISA检测H22荷瘤小鼠TNF-ot，几．2含量 33 3．3 RT-PCR检测移植瘤颗粒酶，穿孔素基因表达 一34 3．4 HE和TUNEL染色检测病理组织 34 3．5 IHC方法检测瘤体中颗粒酶，穿孔素和BAX，BCL-2蛋白表达 34 4．本课题创新点 ．35 第四部分总结与展望 ．36 参考文献 ．．37 附 录 ．．40 附录一缩略词表 ．40 附录二综 述 ．．41 附录三图 片 ．47 附录四致 谢 ．．5 l 附录五个人简历 ．．52 4 万方数据 贵阳中医学院硕士学位论文中文摘要 贵阳中医学院硕士学位论文 中文摘要 目的 研究小半夏加茯苓汤(Xiao Ban Xia Plus Fuling Decoction，XBFD)对H22 荷瘤小鼠的抑瘤作用，并通过血清学和肿瘤细胞凋亡相关分子表达水平的检测， 探讨XBFD抗肿瘤的分子机制及其诱导细胞凋亡的途径，为XBFD在临床抗肿 瘤应用提供理论和实验依据。 方法 建立体内H22荷瘤小鼠模型，随机分为荷瘤模型组，XBFD高剂量组，XBFD 中剂量组，XBFD低剂量组，顺铂组，每组30只。接种次日开始给药，荷瘤模 型组给予生理盐水10 g·k百1，日一次：XBFD高、中、低剂量组，分别给予XBFD4 昏2 g、l g生药·mL。1水煎剂40、20、10 g·k分1，日一次；顺铂组5 nag·kg-1腹腔 注射0．9％氯化钠溶液稀释顺铂，分别于第1、4、7、10日各给药1次，观察小 鼠生存状态及死亡情况等，实验第11日称重眼球取血后处死小鼠，取瘤体。采 用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清，逆转录．聚合酶链反应(RT．PCR)、 苏木精．伊红(HE)染色、原位末端凋亡法(TIINEI。)和免疫组化(IHC)检测 肿瘤组织。 结果 (I)XBFD各剂量组给药后体重均增高，瘤重随剂量增大而降低，提示XBFD 有明显的抑瘤效果。 (2)ELISA结果显示：与荷瘤模型组比较，XBFD中剂量组、顺铂组血清 中的TNF．毡的含量有明显的增加，XBFD高剂量组血清中的IL-2的含量有明显 的增加。 (3)RT-PCR结果表明：与荷瘤模型组比较，XBFD各剂量组颗粒酶A表 达升高，但无显著性差异；XBFD高、中剂量组颗粒酶B表达升高(pn蚴；XBFD 高、中剂量组穿孔素表达升高，促进颗粒酶／穿孔素途径非自愿性细胞凋亡。 (4)HE染色结果显示：建立的模型是成功的。 (5)TUNEL结果表明：XBFD能够增加H22细胞凋亡数量，且随药物剂 量的增大凋亡率升高。 (6)IHC结果表明：XBFD各剂量药组颗粒酶A、颗粒酶B与穿孔素表达 万方数据 贵阳中医学院硕士学位论文均较荷瘤模型组显著升高pnDJ)，而且Bel．2蛋白表达量随药物剂量增大呈下 贵阳中医学院硕士学位论文 均较荷瘤模型组显著升高pnDJ)，而且Bel．2蛋白表达量随药物剂量增大呈下 降趋势，Bax蛋白表达量随药物剂量增大呈上升趋势，调整Bel-2／Bax比值。 结论 XBFD具有增强机体免疫功能，改善生存质量，抑制H22肝癌细胞增殖的 作用，其诱导凋亡途径与颗粒酶／穿孔素参与的“非自愿细胞凋亡”及其增强Bax 蛋白表达水平，降低Bel．2蛋白表达水平有关，并且反映出XBFD对H22荷瘤 小鼠的抑制作用有一定的量效关系。 抑瘤作用可能与以下机制有关： 1．提高TNF．位，IL-2的表达，从而激活T细胞活性和B细胞增殖，介导CTL 发挥细胞毒作用。 2．提高穿孔素，颗粒酶的表达，从而促进穿孔素在细胞膜上形成孔道，颗粒 酶大量进入细胞核激活自溶性核酸内切酶系统，使靶细胞DNA断裂，产生肿瘤 细胞溶解和凋亡，诱导“非自愿细胞凋亡”。 3．通过增强Bax蛋白表达，降低Bel．2蛋白表达，调整Bax／Bel-2比值，促 进H22细胞的调亡。 关键词：小半夏加茯苓汤