trail耐药的kasumi1细胞株的建立及mrna表达谱差异分析内科学专业论文.docxVIP

复 复 旦 大 学 硕 士 学 位 论 文 T R A IL 耐 药 的 K asu m i-1 细 胞 株 的建 立 及 m R N A 表 达 谱 差 异 分 析 E s ta b lis h m e n t o f T R A I L -R e s ista n t K a su m i-1 C ell L in e a n d A n a ly sis o f m R N A E x p ressio n P ro file D ifferen ces 院 系 ： 上 海 市 第 五 人 民 医 院 专 业 ： 内科 学 姓 名 ： 蒋 雪 玮 指 导 教 师 ： 刘 立 根 教 授 完 成 日 期 : 2 0 12 年 04 月 2 2 日 目录 目录 觀 1 刖 5 5 第 一 部 分 T R A IL 耐 药 的 K asu m i-1 细 胞 株 的 建 立 6 1、 材 料 和 方 法 6 2 、 实 验 结 果 12 3 、 娜 2 1 4 、 舰 2 1 第 二 部 分 基 因 芯 片 检 测 细 胞 m R N A 表 达 谱 差 异 22 1 、 材 料 和 方 法 2 2 2 、 实 验 结 果 2 8 3 、 辦 3 2 4 、 舰 32 综 述 白血 病 与 T R A IL 耐 药 研 宄 进 展 3 7 g filt 4 5 播彌 面 播彌 面安 研 究 背 景 ： 肿 瘤 坏 死 因 子 相 关 凋 亡 诱 导 配 体 （T um or necro sis factor related apoptosis inducing ligand , T R A IL ) 对 人类 白血病细胞有杀伤作用 ，而不损伤正 常 细 胞 ，但 其 普 遍 耐 药 也 限 制 了它 的 应 用 。体 外 对 重 组 可 溶 性 T R A IL (reco m b in ant so lub le T R A IL ,rsT R A IL ) 诱 导 急性 髓 系 白血 病 伴 t (8 ; 2 1) 细 胞 株 K asu m i-1 凋 亡 的 研 究 发 现 ，rsT R A IL 到 达 一 定 浓 度 后 ，K a su m i-1 细 胞 株 的 存 活 率 不 再 有 明 显 下 降 ，提 示 K asu m i-1 细 胞 株 对 T R A IL 存 在 一 定 的 耐 药 性 。 第 一 部 分 T R A IL 耐 药 的 K asu m i-1 细 胞 株 的建 立 目的 ：建 立 T R A IL 耐 药 的 K asum i-1 细 胞 株 ，测 定 计 算 耐 药 相 关 指 标 。比较 亲 本 株 和 耐 药 株 的 形 态 、分 子 生 物 学 及 T R A IL 和 受 体 的 表 达 。方 法 ：1) 逐 步 递 增 培 养 液 中 rsT R A IL 的浓 度 ，使 其 间 歇 作 用 于 K a su m i-1 细 胞 ，通 过 体 外 诱 导 筛 选 得 到 耐 药 株 K asum i-1 R (K asum i-1 resistan t cell lin e , K asu m i-1 R )；2 ) 采 用 C C K -8 比 色 法 ，分 别 测 定 K asu m i-1 和 K asu m i-1 R 的生 长 曲线 ，以及 加 入 不 同浓 度 的 rsT R A IL 后 24h 、48h 的生长 曲线 ，计算 两 种细胞 的 IC 50 、耐药指 数(R esistance Index , R I)；3 ) 瑞 氏染色显微镜 下观察两 种细胞及 用药后 的形态 ；4) A nnexin V -F IT C /P I 双 染 流 式 细 胞 术 检 测 细 胞 凋 亡 ；5 ) R T -P C R 检 测 细 胞 A M L 1-E T 0 融 合 基 因 、E T O 外 显 子 9a 、T R A IL 的 三 个 异 构 体 及 T R A IL 受 体 1-4 的 m R N A 表 达 ； 6 )流 式 细 胞 术 检 测 细 胞 表 面 T R A IL 和 T R A IL 受 体 1-4 的表 达 。结 果 ：l)K asum i-l R 细 胞 增 殖 较 K a su m i-1 细 胞 快 ； 2 ) K asu m i-1 细 胞 2 4 小 时 IC 5 0 为 756.833ng/m l(logIC 50 为 2.879±0.14 8) ， K asum i-1 R 细 胞 24 小 时 IC 50 为 1634646.005ng/m l(logIC 50