纺锤丝毒性药物诱导的多倍体肿瘤对化疗药物敏感性的研究临床医学妇产科学专业论文.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的： 肿瘤严重威胁人类健康，化疗是实体肿瘤综合治疗的重要组成部分，紫杉醇、 长春新碱等“纺锤丝毒性药物”是很多肿瘤化疗的一线用药，在临床取得了很好的 疗效，其杀灭肿瘤的重要机制之一为诱导肿瘤细胞凋亡。然而在临床工作中我 们注意到，部分肿瘤对该类药物非常敏感，肿瘤组织在经历数次化疗后消失殆 尽，然而更为常见的现象则是：肿瘤组织在开始化疗的初期对该类药物敏感， 不久出现耐药，或肿瘤组织根本对该类药物无明显反应，后两种现象是导致肿 瘤失控和复发的根本原因。据统计90％以上肿瘤患者的死亡在不同程度上与耐 药有关。 我们的前期研究发现，纺锤丝毒性药物对一部分细胞起到诱导凋亡的作用， 然而有些细胞在接触这类药物时，并非出现凋亡，而是以形成多倍体为结局。 国外学者的研究也发现：多倍体肿瘤对常用的放、化疗极不敏感，具有多倍体 亚克隆的肿瘤预后更差。因此，我们推测多倍体的形成可能与肿瘤发生耐药有 关。多年来，科学家们一直致力于对肿瘤耐药机制的探讨，并提出了很多学说 及可能的机制，，然而至今仍没有找到哪种方法可以从根本上解决这一临床难题。 随着科学的不断发展，人们逐渐认识到肿瘤耐药的发生原因是多方面的，除了 目前多药耐药基因与耐药相关以外，我们推测多倍体的形成很可能是导致纺锤 丝毒性药物使用后肿瘤出现耐药的一个重要原因，然而对于这一可能的耐药新 机制尚无人提出。本研究从纺锤丝毒性药物诱导肿瘤形成多倍体这一现象为切 入点，通过比较多倍体肿瘤与原肿瘤(纺锤丝毒性药物应用前)对各种常用化 疗药物的IC50，探讨多倍体形成与肿瘤耐药之间的关系，并通过深入剖析多倍 体的发生的分子机制，试图找寻解决此种耐药可能的干预点／方法，提出以抑制 多倍体亚克隆的形成为基础的新的预防肿瘤耐药发生的策略。 方法： 以1 00 ng／ml纺锤丝毒性药物诺考达唑处理人乳腺癌MDA．MB．23 l细胞，流 式细胞仪分选获得多倍体肿瘤细胞T-MDA．MB．23 1，观察T-MDA．MB-23 1细胞 的形态学变化和增殖分裂情况。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测比较紫杉 醇、多西他赛、长春新碱、表阿霉素、氟尿嘧啶、依托泊甙和草酸铂对 天津医科大学硕士学位论文T-MDA．MB．231和MDA．MB．231细胞的增殖抑制作用，并计算出不同药物的半 天津医科大学硕士学位论文 T-MDA．MB．231和MDA．MB．231细胞的增殖抑制作用，并计算出不同药物的半 数抑制浓度(IC50)。采用Annexin V-FITC／PI法检测紫杉醇和多西他赛对 MDA．MB．231和T-MDA．MB．23l细胞凋亡的影响。以siRNA技术下调 T-MDA．MB．23 1细胞中Bcl．2 mRNA的表达，采用MTT法检测siRNA干扰后不 同化疗药物对T-MDA．MB．231细胞的增殖抑制作用，评价该基因在多倍体耐药 中的作用。 结果： 1、纺锤丝毒性药物诱导形成的多倍体肿瘤(T-MDA．MB．23 1)具有克隆能力， 长期培养能稳定生长并保持多倍体的倍性，较MDA．MB．231细胞体积增大，其 增殖分裂速度明显低于MDA．MB．23 1细胞俾O．05)。 2、紫杉醇、多西他赛、长春新碱、草酸铂、氟尿嘧啶和表阿霉素对 T-MDA．MB．231细胞的IC50分别为(6．37+0．07)gmol／L、(32．98+1．48)gmol／L、 (35．28+1．66)I．tmol／L、(19．07士0．45)gmol／L、(85．49士3．21)pmol／L和(O．5310．06) lxmol／L，均明显高于MDA．MB．231细胞(P0．01)；依托泊甙对T-MDA．MB．231 细胞的IC50为(2．85士0．50)gmol／L，明显低于MDA．MB．231细胞(PO．01)。 3、T-MDA．MB．231细胞高表达Bcl．2，应用siRNA技术下调该细胞中Bcl．2 mRNA的表达后，多西他赛对T-MDA．MB．231细胞的IC50[(21．52+0．68)gmol／L] 明显降低(PO．05)，对依托泊甙的IC50[(19．5910．48)rtmol／L]u凋增高(P 0．05)。 结论： 1、多倍体肿瘤模型的建立为深入研究多倍体肿瘤提供了良好的平台。 2、纺锤丝毒性药物诱导的多倍体肿瘤对多数抗癌药物耐药，而对VPl6相 对敏感，VPl6可能成为治疗多倍体肿瘤的有效药物。 3、多倍体肿瘤的形成可能是纺锤丝毒性药物应用后肿瘤发生耐药的重要机 制之一，Bcl．2的高表达参与多倍体肿瘤细胞耐药表型的形成，降调Bcl．2的水 平可能成为解决此种耐药的方法；多倍体肿瘤耐药涉及多种复杂机制，而非 Bcl．2独立介导：凋亡机制的失调是多倍体肿瘤