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中文摘要肺癌多药耐药的分子机制研究 中文摘要 肺癌多药耐药的分子机制研究 摘 要 恶性肿瘤是目前危害人类健康最严重疾病之一。近二十年全国性死亡 原因调查显示，死亡率上升幅度最大的是肺癌。目前肺癌的治疗一般采用 手术、化疗、放疗、免疫治疗等综合措施，其中化疗作为全身性治疗手段， 在恶性肿瘤的治疗中具有手术和放疗不能替代的地位。但是肿瘤细胞的耐 药性，尤其是肿瘤的多药耐药性(multidrug resistance，MDR)常导致临床 化疗失败。肺癌耐药机制复杂，由多基因及多途径参与，包括：①多药耐 药基因及P．gP表达增加；②多药耐药相关基因及多药耐药相关蛋白表达增 加；③肺耐药相关基因及肺耐药相关蛋白表达增加；④谷胱苷肽及其转移 酶表达增加；⑤拓扑异构酶表达下降；⑥肿瘤细胞DNA损伤修复能力及 抗调亡能力增强等。因此，若能对肿瘤的耐药性进行预测，可避免使用 MDR型药物，实现肿瘤病人的个体化化疗(individualized chemotherapy)， 做到有的放矢，提高疗效。国内外已有较多文献涉及肺癌的多药耐药问题， 但内容较分散，讨论因素较单一，且存在相互矛盾之处。因此，本课题选 择肺癌作为研究对象，旨在对肺癌的多药耐药性有一个较全面的了解，包 括： (1)应用MTT法进行肺癌组织体外药物的敏感性测定，筛选对非小 细胞肺癌(non．small cell lung cancer，NSCLC)药敏实验的条件，选择对肺 癌化疗的敏感性药物。(2)了解P．gP、MRP、LRP、GST．丌、Topo．II、 p53、Bcl．2、rasmRNA及蛋白在肺癌组织中的表达及相互问联系。(3) 了解P．gP、MRP、LRP、GST-靠、Topo-II、p53、Bcl．2蛋白在肺癌组织中 的表达与肺癌细胞体外药敏之间的关系。(4)肺癌组织与外周血单核细胞 体外药敏试验相关性研究。 1人体肺癌细胞对化疗药物敏感性的测定 1．1非小细胞肺癌药敏实验条件的筛选 1．1．1NSCLC药敏实验中药物浓度的筛选。应用MTT法对25例人体NSCLC 原代细胞进行8种化疗药物不同浓度对瘤细胞抑制率的测定。体外实验药 物浓度(pg／m1)C=50XD／5000×2×103，D为临床每日用药剂量 (m94k94,dd)，50为平均成人体重(蚝)，2为血细胞比积50％的倒数 中文摘要值，乘103后将mg换算成pg。以此浓度为基础值，以10倍比稀释及浓缩 中文摘要 值，乘103后将mg换算成pg。以此浓度为基础值，以10倍比稀释及浓缩 各1个等级，作为实验药物的浓度等级。实验分三组①0．1C组：②1c组； ③10C组。结果如下： 1．1．1．1药物浓度为0．1C时，仅MMC、5-Fu敏感i而药物浓度在lc及10C 时，敏感药物分别增至5种至4种，说明提高药物浓度可提高其对瘤细胞 的抑制率，但从其排序上看，抑制率大于50％的药物都是MMC、CBDCA、 CDDP，其药物种类并无区别。 1．1．1．2同一药物不同浓度对肺癌细胞抑制率的比较：1c与0．1C浓度时， 除5．Fu有下降趋势外，余各药均有上升趋势，其中CDDP、CBDCA、 MTX具有明显剂量依赖性(P．O．05)：10C与lC浓度时，ADM、CDDP、 VCR、MTX均有上升趋势，而CBDCA、MMC、5-Fu、Vp．16呈下降趋势； 5一Fu下降明显(P0．05)。 结果提示：NSCLC细胞MTT法药敏实验的药物浓度应为临床用药量 的计算值(1C)。 l。1．2 NSCLC药敏实验中药物作用时间的筛选。应用MTT法对25例人体 肺癌原代细胞进行8种化疗药物不同作用时间对瘤细胞抑制率的测定。实 验药物浓度为计算值(1C)，实验分三组@24h组；②48h组：@72h组。 结果如下： 1．1．2．1作用时问为24小时无敏感药物；作用时间为48小时， CDDP、 CBDCA、MMC、5-Fu敏感；作用时间为72小时，CBDCA、CDDP、MMC、 5-Fu敏感。 1．1．2．2同一药物不同作用时间对肺癌细胞抑制率的比较：48小时与24小 时之间比较，各药对肺癌细胞的抑制率均有上升趋势，ADM、CBDCA、 MMC、5-Fu药物有显著性差异(Po．05)：72小时与48小时之间比较， ADM、CBDCA、MMC、5-Fu、MTX均有上升趋势，其中ADM有显著性 差异(尸O．05)；而CDDP、Vp一16、VCR呈下降趋势；VCR下降明显 (P0．05)。 结果提示：NSCLC细胞MTT法药敏实验的药物作用时间以48小时 为宜。 1．2化疗药物对原代肺癌细胞抑制作用的比较 观察8种化疗药物对肺癌原代细胞抑制率的影响。89例患者术前均未 中文摘要接受过药物治疗。实验分组：男性70例，女性19例；非小细胞肺癌(NSCLC