表皮细胞成纤维细胞和几丁质胶原蛋白复合人工皮移植实验研究外科学骨外专业论文.docxVIP

表皮细胞、成纤维细胞和几丁质-胶原蛋白 表皮细胞、成纤维细胞和几丁质-胶原蛋白 复合人工皮移植实验研究 摘要 目的：(1)制作几丁质．胶原蛋白膜，并探讨其作为真皮支架的可行性。(2) 以几丁质．胶原蛋白膜为载体，体外构建含表皮细胞、成纤维细胞的活性复合皮， t 并进行动物移植实验，为临床应用奠定基础。L方法：(1)以酸溶法制备胶原溶液， 、＼ 添加一定比例的脱乙酰化几丁质，冻干成膜，0．05％戊二醛溶液浸泡交联，行体外 膜吸水及酶降解实验，检测其一定时间的膜吸水及耐受酶降解能力；将制备的几 丁质一胶原蛋白膜包埋于sD大鼠皮下，定期取材检测其组织相容性、血管化能力、 体内材料降解情况。(2)将已制备并经体外检测合格的几丁质一胶原蛋白膜与自体 断层皮片复合移植，观察表皮分化、真皮的再形成及重塑情况。(3)取健康成人 环切包皮，分离成纤维细胞、表皮细胞，分别制成单细胞悬液，将几丁质胶原蛋 白膜(有孔面向上)平铺于60mm培养皿中，首先接种成纤维细胞，培养2天后， 更换培养液，翻转膜，使光滑面朝上，再种植表皮细胞。定期观察细胞与材料的 粘附、细胞贴壁及其生长增殖情况。(4)将体外构建的复合皮移植于裸鼠全层皮 肤缺损创面，观察复合皮移植的成活率，比较创面愈合后的质量。应用组织学、 免疫组织化学及原位杂交技术检测移植皮肤的体内改建，表皮细胞、成纤维细胞 体内存活、增殖情况。结果：(1)制备的几丁质一胶原蛋白膜，呈微黄、半透明状， 纤维排列呈网状，一侧较光滑，孔小，另一侧孔稍大，孔径大小保持在50～250 ta m 之间。其吸水性能优于单纯的胶原蛋白膜，体外酶降解缓慢。皮下埋植实验显示 材料的组织相容性良好，无明显炎症反应，血管化早，体内降解缓慢，后期经改 建可形成纤维排列较规则的类真皮样结构。(2)几丁质一胶原蛋白膜与自体断层皮 片复合移植后愈合后皮肤质量明显改善，皮肤收缩减轻。组织学显示复合移植组 表皮层分化良好，表皮真皮连接处基底膜连续，真皮内胶原纤维排列有序，未见 结节状瘢痕组织结构。(3)几丁质一胶原蛋白膜对成纤维细胞、表皮细胞无明显毒 性作刚，成纤维细胞培养l天后，细胞贴附于材料支架，细胞胞体较大，呈典型 的梭形。加入表皮细胞复合培养2天示表皮细胞贴壁生长，并已分化、增殖。复 的梭形。加入表皮细胞复合培养2天示表皮细胞贴壁生长，并已分化、增殖。复 合皮构建2周，网格支架及孔内均有大量细胞生长，膜表面细胞融合成片，表皮 细胞分化形成复层。(4)复合皮移植后可形成新的皮肤，表皮细胞、成纤维细胞 —÷——————————_一 体内存活、增殖良好，后期可形成较好的上皮层，表皮真皮连接处基底膜连续， 、／ 真皮内胶原纤维排列有序订结论：(1)几丁质一胶原蛋白膜具有较好的物理及生物 ， 学性能，组织相容性好，』缸管化能力强，体内、外降解慢，具有良好的真皮替代 功能。(2)体外构建的复合皮能一次性封闭全层皮肤缺损创面，培养的表皮细胞、 成纤维细胞能继续在体内存活、增殖、分化。 【关键词】 创面修复：几丁质，胶原蛋白膜、复合皮组织工程 丝二：兰堕查竺 丝二：兰堕查竺 !兰塑茎 !!兰羔塑竺!L 中文摘要 表皮细胞、成纤维细胞和几丁质一胶原蛋白 复合人工皮移植实验研究 临床上，应用适当的方法处理各种原因所致的皮肤创面，使之获得快速、有 效、持久、良好的修复，仍是目前外科领域亟待解决的基本问题之一。对于严重 创伤、烧伤、慢性静脉溃疡、褥疮以及皮肤恶性肿瘤切除所致的大面积皮肤缺损 尤其重要。针对大面积皮肤缺损缺乏供皮区，人们应用了许多技术和方法来提高 自体皮的扩展倍数，如邮票状皮片、网状皮、大张异体皮嵌植自体小皮片混合移 植、微粒皮及自体表皮细胞培养等方法，均能数倍甚至数百倍地扩展自体皮的覆 盖面积，以获得创面的完全覆盖。但由于这些方法构建的皮肤均缺乏完整的真皮 结构，造成创面愈合时间长，愈合质量差，瘢痕形成严重，远期创面极易收缩、 溃破、起水疱，影响机体的外观和功能。 研究表明，真皮组织的作用不仅仅提供牢固的机械保护，改善创面愈合的外 观和质地，而且对上皮细胞生长分化以及胶原纤维再生起着相当重要的作用。真 皮的基底膜成分可促进表皮真皮交界区正常结构的形成，促进上皮细胞的生长和 分化。真皮结构可促进成纤维细胞合成分布合理的新生胶原组织，防止瘢痕的过 度增生。因此，人们逐渐意识到仅仅封闭创面是不够的，必须采取合理的措施提 高创面愈合的质量，使其在外观和功能上均达到满意的效果。才能最大限度的提 岛患者的生存质量，有利于他们重返社会。因此，人工真皮的研制逐渐得到重视。 组织：[程的出现和发展为新型人工皮肤的构建提供了一条崭新的途径。真皮 卡夸代物的研制及体外构建复合皮是皮肤组织工程研究的主要内容。目前，国外研 究者已成功开发了多种真皮替代物，如Bi