humanin通过抑制nmda受体nr1亚基表达增加和nr2b亚基磷酸化在兴奋性神经毒中发挥保护作用生理学专业论文.docxVIP

山西医科大学硕士学位论文(3)Western．blot 山西医科大学硕士学位论文 (3)Western．blot 神经元膜NMDA受体NR2B亚单位Tyrl472磷酸化水平的检测 4、统计学处理 测定结果数据均以i±s表示，运用SPSSll．5软件进行单 因素方差分析，方差齐者组间比较用LSD检验，方差不齐组间比较用Games--Howell检验， 检验水准a=0．05，P0．05表示有显著性差异。 结果：1、HN拮抗NMDA诱导的兴奋性神经毒 倒置显微镜观察培养的原代皮层神经 元呈椭圆形、折光性好，活性强，有明显的神经元之间突触结构的联系；NMDA(1001．tmol／L) 组的神经元表现出明显的毒性作用，包括神经元的胞体肿胀，突起较对照组明显消失，呈 现悬浮生长；MK一801(NIVlDA 100I．tmol／L+MK．801 10pmol／L)组的镜下结果显示，上述毒性作 用基本消失，神经元形态结构与对照组相比无显著差异，未发现明显结构改变；HN(NMDA 100pmol／L+HN lpmol／L)组的神经元形态结构与MK-801组结果相似，未发现明显的细胞毒性 破坏的形态结构变化。结果表明，HN对于NMDA诱导的神经毒性作用(形态结构改变)具有 抑制效应。 2、HN抑制卜瓜嗄DA诱导神经元膜表面NMDA受体NRl亚单位蛋白表达的增加 (1)免疫细胞化学检测 与对照组相比，NMDA组中绿色荧光标识的NMDA受体NRl亚 单位蛋白在神经元胞体两极朝向突起的起始部位及核膜表面的表达显著增加。与NMDA组比 较，HN组和MK-801组绿色荧光标识的NMDA受体NRl亚单位蛋白表达显著减少。结果表明， NMDA可诱导神经元膜表面NMDA受体NRl亚单位蛋白表达的增加，而HN可减弱由NMDA诱导的 神经元膜表面NMDA受体NRl亚单位蛋白表达的增加。 (2)流式细胞仪荧光定量检测 流式细胞仪的荧光定量检测发现，对照组NRl的平 均荧光强度值为26．688±1．507，NMDA组NRl的平均荧光强度值为48．708±3．494，表明NMDA 受体NRl亚单位蛋白在NMDA诱导下表达量明显增加，两者比较具有显著性差异(p0．05)； MK-801组NRl的平均荧光强度值为27．686±2．140，HN组NRl的平均荧光强度值为29．74± 3．288，两者分别与NMDA组比较都具有统计学意义(p0．05)。上述结果表明，在NMDA和 HN共同孵育2h的神经元中，HN能抑制由NMDA诱导的NMDA受体NRl亚单位蛋白表达的增加， 与免疫细胞化学检测的定性检测结果一致。 3、HN抑制卜m仍A诱导神经元膜表面NMDA受体NR2B Tyrl472磷酸化水平的增强 Western．blot结果显示，在实验各组中，总NR2B亚单位蛋白表达水平没有改变，而NMDA 组的NR2B Tyrl472磷酸化水平较对照组明显升高(p0．05)，HN组的NR2B Tyrl472磷酸化 水平较NMDA组的明显降低(p0．05)。结果表明，NMDA可诱导NMDA受体NR2B Tyrl472磷酸 化水平增强，而HN可降{L毛NMDA诱导的NMDA受体NR2B Tyrl472磷酸化水平的增强。 结论： 1、NMDA诱导体外培养的皮层神经元NMDA受体NRl亚单位表达增加，提 示NMDA受体数量增加。 2、NMDA诱导体外培养的皮层神经元NMDA受体NR2B亚单位磷酸化水平增强，由 II 山西医科大学硕士学位论文此可能增强NMDA受体通道的功能，包括在兴奋性神经毒过程的作用增强。 山西医科大学硕士学位论文 此可能增强NMDA受体通道的功能，包括在兴奋性神经毒过程的作用增强。 3、HN可抑制NMDA诱导神经元膜表面NRl亚单位表达的增加以及使NR2B亚单位 磷酸化水平下调，这可能是HN抑制兴奋性神经毒发挥神经保护作用的重要基础。 关键词：Humanin，NMDA受体，NRl，NR2B，兴奋性神经毒 III 山西医辩大学硕士学位论文Humanin 山西医辩大学硕士学位论文 Humanin protects neurons against NMDA—induced neurotoxicity by down regulation NR 1 expression and supprestion NR2B tyrosine phosphorylation Abstract Excitatory neurotoxicity is triggered by the overactivation of N—methyl—D-aspartate receptors(NMDARs)that induced by overloading of glutamate，which is a cr