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哺乳动物性别控制相关问题的研究摘要 哺乳动物性别控制相关问题的研究 摘要 本论文是研究有关哺乳动物性别控制相关的问题。论文共分为 两大部分：第一部分，包括第一章和第二章，为文献综述部分；第二 部分，包括第三至第六章，为试验研究部分。 第三、四章研究的目的是确定流动细胞分离检索仪分离的精子对 牛卵母细胞体外受精和胚胎发育的影响，以及确定精子分离过程及染 色是否会引起胚胎染色体异常。共使用了4273个从牛卯巢抽取的9日 母细胞并分别与3种类型的冷冻精子(分离、染色未分离和未染色未 分离)进行体外受精(IVF)试验。这些精子分别来自于3头公牛， 每头公牛重复试验3～5次。此外，还应用细胞遗传学方法对351个 第6～8 d的IvF囊胚进行了染色体分析。数据使用ANOVA程序、 方差分析或卡方检验等进行统计分析。路果显示，1)3种类型精子受 精后的囊胚率未有显著差异，分别为20．4％，22．62％和22．14％，只 是分离精子的卵裂率比未分离的精子要低(71．93％比53．66％： P0．05)。2)所测试的3头公牛的卯裂率和囊胚率在公牛之间有所差 异，即H008号公牛的卵裂率明显低于H010和H016号公牛(分别 为40．6％比74．4％和69．8％；p0．05)，囊胚率明显低于H010号公牛 (17．4％比25．1％；p0．05)。3)分离精子、染色未分离精子和未染 色未分离精子的胚胎中，染色体组成表现为异常的，即嵌合体的胚胎 分别占57％(82／145)、59％(59／106)和65％(65／100)，三者染色 体异常的比例无显著差异。4)胚胎染色体异常的频率在不同公牛之 间存在差异，即H016号公牛与H008号公牛的胚胎染色体异常率差 异显著(30％比45％；p0．05)。5)第6、第7 d和第8 d回收的囊胚 染色体异常频率之间没有显著差异。结果证明：1)分离过程或染色并 没有影响胚胎发育到囊胚，也没有影响胚胎的染色体组成，流动细胞 分离检索佼分离的糟予霹以鬟效缝潮手牛簇黪懿体终生声；2)瓤艟的 分离检索佼分离的糟予霹以鬟效缝潮手牛簇黪懿体终生声；2)瓤艟的 发育阶段对胚胎染色体的异常也没糟影响．，， 第懿章碜究的目瓣是，比较崮流动细胞分蔫检索l交分离的牛x 和Y精子及未分离精子进行单精子胞质内注射(1CSI)和IVF后的 胚胎发裔状况及染色体组成情况，确定分离精子趋否对ICSI缭栗鸯 影响。蛹来自乎同一头公牛(14010)分离的x和Y及来分离的精子 分别和傣外成熟的卵坶细胞进行ICSI和IVF，结果显示，1)3种精子 ICSI或tVF后的卵裂率和囊胚发夸率没鸯显著差异(只是IVF组分 离精子的卵裂率低干爿琶分离精子，pO．05)；2)同～种类型精子ICSI 畿IVF矮的郛裂率及囊胚率差异也不显著，分离糖子ICSI的鳃裂率 和囊胚率与其IVF的结果榈近，分别为71．75％比65％，22+l％比 25。6％。将1CSI和IVF产生的第7 d秘第8 d囊疑进行低渗、黼定及 染色等处理后，检查_II丕胎细胞数和染色体组成，其结果是，分离的x 秘Y精子和寒分离精子ICSI后囊坯的平均绣臆数三蠹之漓竞差舅 (p0．1)，同样IVF艚的囊胚平均细胞数也无差异，但ICSI组的平 均细胞数低予IVF维(p0．005)。染色体分析的结梁表嘲，ICSt和IVF 2组囊胚的染色体异常率，3釉类型的精子之间不存在差异。ICSI和 IVF两组的囊胚染色体异常率，二者之间也未褥显著蓑异(30．9％比 33．6％)。总之，分离糖子没蠢影响ICSI鼷骀的发弯，ICSl过程及分 离精子也没有增加ICSI胚胎染色体的异常率，流动细胞分离仪分离 麴牛糖乎可以鸯效的应用于ICSI。y 第六章的研究是运用分子克隆技术，从小鼠的睾丸中分离和克隆 一个耨的基因，称秀GSE(gonad．specific expression gene)。≈陵蓄酸 序列分析揭示，GSE cDNA的开放阅读框架的长度为745bp，编码由 247个簸基酸残基组成的、颈测分子量秀27．6 Kda的蛋白质。从推断 出的蛋白质氨基酸排列顺序表明，GSE蛋囱质在细胞中可能是一个不 带有信号肽的可溶性疆自。Southem印迹必检测到有限数量的基因维 DNA抟断，掇示GSE是一个单拷贝的基因。用放射性阉位素标记了 的小鼠GSE cDNA为探针，与从各种成年小鼠组织中提取的Poly(A) +RNA(各299)邀短Northern鞠迹分毫蠢显示，GSE mRNA在奎鼠 体细胞缀绥(，§、翳、臀、瓣、酗、骨懿麓、及膊)孛浚鸯检测弱其 体细胞缀绥(，§、翳、臀、瓣、酗、骨懿麓、及膊)孛浚鸯检测弱其 表达，假在睾丸中有强转录表达，谯卵巢中有低转录表达。为了阐明 GSE表达与配子发生的关系，获0～49霜龄垂鬣