肠癌细胞中pten基因缺失对姜黄素类药物的敏感性研究遗传学专业论文.docxVIP

温州医学院硕士学位论文肠癌细胞中PTEN基因缺失对姜黄素类药物的敏感性研究 温州医学院硕士学位论文 肠癌细胞中PTEN基因缺失对姜黄素类药物的敏感性研究 中文摘要 目的：PTEN(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 1 0、 基因是继p53之后发现的又一重要的肿瘤抑制基因。在许多人类 癌症中都存在PTEN基因突变，因此，PTEN基因突变代表了正 常细胞和肿瘤细胞重要的遗传不同，是一个潜在的癌症治疗靶点。 本研究中，我们将通过体细胞基因敲除技术，在人肠癌细胞 HCTll6建立PTEN基因敲除细胞系，与PTEN野生型进行对比 研究，检测它们对抗肿瘤药物，如CPT-1 1、5．氟尿嘧啶(5．FU)、 双氢青蒿素(DHA)、姜黄素的敏感性，以期为寻找针对PTEN基 因的肿瘤个性化治疗药物提供理论依据。 方法： 通过体细胞基因敲除技术，敲除HCTl 16细胞中的PTEN基因； Western blot检测相关蛋白的表达；MTT和结晶紫染色实验检测 细胞增殖情况；MTT实验比较抗肿瘤药物CPT-11、5一氟尿嘧啶 (5．FU)、双氢青蒿素(DHA)和姜黄素对HCTl 16 PTEN基因野生型 和敲除型细胞的杀伤作用；克隆形成实验检测姜黄素对HCTll6 PTEN基因野生型和敲除型细胞的克隆形成数量的影响；流式细 胞术检测细胞凋亡情况。 结果： (1)通过同源重组获得两个PTEN基因敲除细胞株，测序结果表 明PTEN基因4号外显子序列完全缺失。 (2)Western blot结果证明在HCTll6 PTEN壬细胞中PTEN蛋白表 达完全缺失。 (3)PTEN基因缺失对HCTll6细胞的生长及HCTll6细胞对 CPT-11、5-FU、DHA的敏感性没有明显影响。 (4)PTEN基因缺失增加肿瘤细胞对姜黄素的敏感性。姜黄素杀伤 HCTl 16 PTEN+／+细胞的IC50为12 lxM，而在PTEN士细胞中则降低 50％，为6 pM。 (5)姜黄素处理后，PTEN基因缺失导致细胞克隆形成数量减少。 结论： 通过体细胞基因敲除技术，我们成功获得两个PTEN基因缺失的 温州医学院硕士学位论文HCTl 温州医学院硕士学位论文 HCTl 16细胞株，并发现PTEN基因缺失增加HCTl 16细胞对姜 黄素的敏感性，提示应用姜黄素治疗肿瘤时应参考患者的PTEN 基因状态。 关键词：PTEN基因；姜黄素；体细胞基因敲除；细胞生长；肠癌 PTEN PTEN loss affects the sensitivity of colorectal cancer cells to CUrcUmm Abstract Purpose： PTEN(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 1 0) is ranked the second most frequently mutated tumor suppressor gene after p53．PTEN mutations represent an important genetic difference between normal and tumor cells and therefore a potential target for cancer therapy．In this study,PTEN gene in HCTl 1 6 was deleted using the somatic cell gene—knockout technique．With the PTEN wild-type and null isogenic cells，cytotoxicity of several anti—cancer drugs，including CPT-1 1，5-fluorouracil(5-FU)，dihydroarternisinin (DHA)and curcumin were determined，in the hope of finding drugs that preferentially kill PTEN—deficent cells． Methods： The PTEN—deficient derivatives of HCTl 1 6 cells were obtained using somatic cell knockout technique．Protein expressions were detected with western blot．Cell proliferation was measured by M’丌 and cryst