儿童alport综合征的临床及遗传学特征研究儿科学专业论文.docxVIP

硕士学位论文儿童A 硕士学位论文 儿童A I port综合征的临床及遗传学特征研究 硕士研究生：何威 指导老师：夏正坤 摘要 研究背景 Alport综合征(Alport sydrome，AS)是一种常见的遗传性。肾小球疾病，以 持续性血尿、晶体及眼底改变、高频神经性耳聋及进行性肾功能衰竭为主要临 床特征。AS有3种不同的遗传方式，85％为X连锁显性遗传(x一1inked Inheritance AS，XLAS)，由编码0【5链的COL4A5基因突变所致，病变基因定位于Xq21．q22； 15％是常染色体隐性遗传(Autosomal Recessive Inheritance，ARAS)，其致病基 因是COL4A3或COL4A4基因，病变基因定位于2q35一q37罕见的有常染色体显 性遗传(Autosomal dominant inheritance AS，ADAS)，致病基因亦为COL4A3或 COL4A4基因。 过去认为AS为一种罕见病，早期调查发现AS的发病率为l：5 000一--10 000fl】， 我国大样本资料显示，全国儿科2315例行肾活检的患者中，AS占12％[21，随着 诊断技术的进步以及对遗传病认识的提高和重视，临床上可见越来越多有关AS 的报道。AS目前尚无特异性的根治方法，患儿多进展至终末期肾功能不全。在 儿童终末期肾病(End．stage Renal Disease，ESRD)中，AS患儿约di3％t31。因其 危害性极大，越来越引起临床医生的关注。但AS患儿发病隐匿、临床表现多样， 相当一部分忠)Lll备床表现不典型，临床医师极易漏诊或误诊，且AS预后较差， 因此早期鉴别和诊断AS具有重要的临床意义。 目前认为对于AS诊断较为可靠的标准为3条：电镜下肾小球基底膜 万方数据 摘要(glomerular 摘要 (glomerular basement membrane，GBM)出现典型的超微结构改变；皮肤或肾 组织基底膜Ⅳ型胶原0【链表达异常；COL4A5／3／4基因突变。临床上30％的AS患者 基底膜Ⅳ型胶原Ⅱ链可无缺失表达，目前该现象并无确切的机制进行阐述，推测 是因为某些突变对Ⅳ型胶原q链的结构和功能影响不大所致。AS患儿在疾病早期， 电镜下肾小球基底膜可表现正常或仅表现为弥漫性变薄，并非所有AS均表现为 GBM弥漫厚薄不均、分层甚至断裂等特征性病理改变。因此，对于基底膜Ⅳ型 胶原Ⅱ链表达正常或电镜下GBM未出现典型超微病变者，亦不能轻易排除AS。 对于AS而言，临床表现以及肾组织(或皮肤)的Ⅳ型胶原0【链染色及肾组织电镜 检查仅为AS的诊断提供辅助资料，确诊该病最可靠的标准是基因诊断。 AS相关致病基因有3个，分别为COL4A5基因(51个外显子)、COL4A3基因 (52个外显子)，COL4A4基因(48个外显子)，因其外显子数目庞大且无热点突 变，基因诊断并未广泛开展。传统的Sanger法测序认为是遗传病基因诊断的“金 标准”，但其耗时、费力且价格昂贵，对于外显子数目庞大的AS致病基因并不适 用。第二代高通量基因测序(Next generation squencing，NGS)较以往的测序技 术而言，具有高通量、速度快、低成本的特点，利用NGS一方面能检测出遗传 病己知的致病基因，另一方面还可发现未知致病基因突变或新的基因突变位点。 国内采用该技木对AS家系进行研究的报道较少，多为病例报导或少数家系的基 因突变分析。因此，本研究通过收集30例疑似及确诊AS的患儿，通过完善肾脏 病理、临床表现及基因检测等资料，确立AS患儿的个体化诊断，进一步分析AS 患儿的基因突变及临床表型特征，明确AS基因突变类型，丰富AS基因突变数据 库，为AS深入的发病机制探讨提供基础工作。另外研究中检测到两例患儿存在 同义突变，分别为c．3246GA(p．1082KK)、c．465GA(p．155KK)，更新了传 统认为“同义突变不致病”的观念，为同义突变的功能验证研究提供了依据。 目的 本研究通过收集30例疑似及确诊AS的患儿，通过收集AS患儿家系的临床资 料，初步分析AStl缶床表型的特点；通过完善肾脏病理、临床表现及基因检测等 万方数据 硕士学位论文资料，确立AS患儿的个体化诊断，丰富AS的诊断深度；分析AS患儿的基因突变 硕士学位论文 资料，确立AS患儿的个体化诊断，丰富AS的诊断深度；分析AS患儿的基因突变 数据，明确AS基因突变类型，丰富AS基因突变数据库，为AS深入的发病机制探 讨提供基础工作。 方法 选取2005年1月至2015年10月在南京总医院儿科病区住院确珍或疑似AS 的30例患儿为研究对象。通过基因测序后所有患儿均符合AS诊断标准。收集 患儿及家系中患者的性别、起病