钝顶节旋藻cpcb基因上游序列结构功能的研究海洋生物学专业论文.docxVIP

钝顶节旋藻∞栅基因上游序列结构功能的研究 钝顶节旋藻∞栅基因上游序列结构功能的研究 钝顶节旋藻cpoB基因上游序列结构功能的研究 摘要 醵绿色荧光簧宣鏊随eJp)为报告基因，掏建了由键顶节麓藻藻蕊爱鑫cpcB 基因上游序列驱动的绿色荧光鬣白表达载体，通过荧光最微镜检测和流式细胞仪 证明，GFP能够在大肠秆菌中袋达。SDS—PAGE分析表踞，GFP在37℃条件下 的表达承平约占菌体总攫自的16％左右，雄攫4凌藻蓝强自基霞上游序列中可能撵 在较强的启动予元件。并且GFP在大肠杆菌中的表达受到培养温度的影响，温 凌越裹，表达承乎越意。怼黎译起始嚣({双)黪软穆分辑窝突变努恚蓐显示，～ 种RNA的特殊二级结构(RNA温度计)与温魔的影响有关，在钝顶节旋藻藻麓 鬣自cpcB基因鹃T1R中，可能也存在这耱结稳。 启动子分柝软件预测显示，在cpcB基因上游序列中存在6条启动子，并采 用定点突变方法分离，实验证嘲每条扁动子均能单独羧制GFP表达。通过流式 缨照纹对GFP凌达承平分折曼示，第三条启动孑豹强度最高，第四条次之。邋 过对第三条启动子一35元件(TT．四cA)的点突变分析发现，C和T两个碱基对 绦持癌渤予熬强发是嚣黪重要黪，任秘突交垮胃萼l起GFP表达塞严重下降。 在cpcB基因上游序列中有6个短的开放阅读框，其中三个可能具有编码功 髓，蕹澜这些开放阅读框或茭藏因产物可耱参与藻蓝鬣色基戮静表达灞控。在 +321—37l的区域富含AT(90％)，它的缺失引起GFP寝达水平下降，说明该AT 区域对扁动子的活性有促进作用。 采髑SmartRace技术对藻蘸蛋白基因豹转袋特征邀行了分辑。在蒺体内藻簸 蛋白基闲只有 条转录产物，从PCR产物的大小和对转录起始位点的分析可知， 鏊因数转录是鑫l第一条震羲子决定豹。还竟鬻了节旋藻其建燕系豹cpcB基因黪 部分上游序列和编码区的部分序列。所扩增的片段长度分别为474bp，包括257 bp 静上游序列和217 bp的编码酝序列。所克隆鸵上游黪碉，以及FACttB438， FACHB793和FACHB790的掣嬲基因编码区序列未见报道。从比对结果看，供 试的7个序列的碱基变异不大。在474bp中，共有31处变异，其中上游序列2l 处，编码区lO她，且变异主要簇中在FAcH8439，其他序列仅个别碱蕊的改变。 cpcB基因的上游序列的相似性装明，不闻品系的节旋藻的藻蕊蛋白基因可能存 钝顶节旋藻cpedl摹因上游序列结构功能昀研究在共同的表达调控投剑。 钝顶节旋藻cpedl摹因上游序列结构功能昀研究 在共同的表达调控投剑。 通过阍源重组的方法，将藻蓝爱囱罄围上游序列及蕻驱动的g≯基因整合到 聚球藻Synechococcus sp．PCC 7942戆基鬻缀中，逶过荧光曼擞铙梭溺鞫流式缁 稳仪证翻，GFP髓够在其中表达，从而丰句建了以异源蓝藻为宿主的报告蒸因表达 系统。并考察了遐强对GFP表达鹩影响。实验涯嚼，光强对GFP表达龄有～定 的影嫡。光强在lOlamot m矗s4辩，GFP装达水平黻高。警低予lO}；Lmol nfsl时， 光强度越小，GFP表达承平越低。当光强大予10p．mol m。so游，毙强菠髌高， GFP表达东平反隔趋低。通过印黪鍪阌上游彦翔S’端缺失分擀，在一218至-276 的隧域可自存在光殷应元件。 在该缀告系统还考察了硫、磷、氮、铁等元索缺乏辩GFP袭达的影酾。在 营养元索缺乏的愤况下，GFP的褒达承乎均有不周程度的下降。其中，辕元素缺 乏对GFP豹表达影嫡稽蹿较，j、，谳氮元素缺乏对GFP酌裘这影晌褶辩较大。 关键溺：麓旋藻；绿色焚兜蝥交；突变；寤幼予；c一藻蘩蘩自 钝顶节旋藻cpcB基因上游序列结构功能的研究Studies 钝顶节旋藻cpcB基因上游序列结构功能的研究 Studies on the structure and function of the upstream sequence of cpcB gene from Arthrospiraplatensis Abstract A green fluorescent protein(GFP)expression vector was constructed、而t}l the reporter gp gene under the promotion of the upstream sequence of cpcB gene from Arthrospira platensis．Fluorescent microscope and flow cytometer analyses showed that GFP could express in E．coli,and it could be inferred fro