实验二、细菌染色法..pptVIP

革蓝氏阳性和阴性菌细胞壁成分比较 成分 占细胞壁干重的% 革蓝氏阳性菌 革蓝氏阴性菌 肽聚糖 含量很高（50-90） 含量很低（~10） 磷壁酸 含量较高（50） 无 类脂质 一般无（ 2） 含量较高（~20） 蛋白质 无 含量较高 革兰氏染色的意义 细菌分类鉴定 指导临床用药 四、实验步骤 （一）单染色法 取大肠杆菌或葡萄球菌中任一种进行单染色。 （二）革兰氏染色法 取另两种菌进行革兰氏复染。 （一）单染色法 方法 涂片 初染 媒染 脱色 复染 镜检 五、思考题 1、比较单染色法和复染色法的优缺点？ 2、革兰氏染色有哪些步骤，要注意哪些步骤？为什么？ 3、革兰氏染色有何实际意义？ 4、细菌染色结果为红色就是G-吗？为什么？ 5、在你所做的革兰染色制片中细菌染成了何颜色？并判断是G+还是G-? 微生物分类鉴定的特征 形态学和生理生化特征 血清学实验和噬菌体分型 氨基酸序列和蛋白质分析 核酸碱基组成和序列分析 形态学特征 培养特征、菌落的形状、大小、颜色、表面特征、光泽等 细胞形态：形状、大小、排列方式 特殊结构：鞭毛、芽孢、孢子、荚膜等 细胞内涵物 染色反应：革兰氏染色、抗酸性染色 运动性 球菌 杆菌 杆菌 螺菌 涂片 菌液涂片时不需滴加生理盐水； 注意练习无菌操作； 取菌不要贪多，接种环上肉眼可见菌苔痕迹即可； 菌苔在生理盐水中涂片要均匀，局部不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性。 ⑴初染 将涂片置于桌面上，滴加结晶紫染色液于细菌涂抹处，使其布满菌膜，染色1min。倾去染色液，用自来水小心地冲洗去多余染液，甩净积水。 ⑵媒染 滴加(Lugol)碘液覆盖菌膜，染1min，水洗。 ⑶脱色 滴加95%乙醇于载玻片上，直至流下的乙醇无色，然后水洗（终止脱色），甩净。 ⑷复染 滴加稀释复红染液于菌膜上，覆盖住菌膜，染色1min，水洗，甩净，最后用吸水纸轻轻吸干。 干燥后，置油镜观察。被染成紫色者即为革兰氏阳性菌(G?)；被染成红色者是革兰氏阴性菌(G-)。 1、涂片 取一块干净的载玻片平放在桌面上，在载玻片中央滴一滴生理盐水（或蒸馏水）； 无菌操作从试管中生长有琼脂斜面上挑取少许菌苔； 将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜。 注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。 2、干燥 将涂好菌膜的载玻片平放在桌面上，室温下自然干燥。 3、固定 手持已经自然干燥的涂好菌膜的载玻片，涂面朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次，热固定细菌细胞。 注意：热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态。 4、染色 将热固定的细菌涂片平放于在桌面上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。 染色时间： 吕氏碱性美蓝染色1~2min； 石炭酸复红染色约1min 草酸铵结晶紫染色约1min。 5、水洗 将细菌涂片上染液倒入废液缸中； 手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无色为止。 注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急，过大，以免涂片薄膜脱落。 6、干燥 自然干燥：将染好色的细菌涂片平放在载玻片架上，室温下自然干燥； 吹干：将染好色的细菌涂片平放在载玻片架上，用电吹风冷风或低温热风吹干； 吸干：将染好色的细菌涂片平放在一张吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂片两面水分吸干。 7、镜检 涂片干燥后镜检（油镜）。 注意：涂片必须完全干燥后才能用油镜观察(防止水的折射，以便于观察)。 Microbiological Sterile Techniques * * 实验二 细菌染色法 一、目的要求 1、掌握细菌染色标本的制备。 2、掌握简单染色法、革兰氏染色法的原理及操作步骤。 3、熟悉革兰染色法在鉴定细菌上的重要意义。 二、基本原理 细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，显示出细菌的一般形态结构及特殊结构，从而有利于对细菌标本的观察。 细菌染色法可分为单染色法和复染色法两大类。 1、简单染色法原理 这是最基本的染色方法，由于细菌在中性环境中一般带负电荷，所以通常采用一种碱性燃料进行染色（如美蓝、碱性复红、结晶紫、孔雀绿、蕃红等）。这类染料解离后，染料离子带正电荷，故使细菌着色。 2、革兰氏染色法原理 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的重要鉴别染色法，通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。 革兰氏染