实验分析基本技能培训(3)..ppt

分光光度分析法 一吸光光度法基本原理 一、紫外可见吸光光度法的特点 (1)具有较高的灵敏度.一般物质可测到10-10----10-6 mol.L-1.适用于微量组分的测定。 (2)有一定的准确度 该方法相对误差为2%---5%。 (3)操作简便,快速,选择性好,仪器设备简单。 (4)应用广泛 可测定大多数无机物质及具有共轭双键的有机化合物。 二. 物质对光的选择性吸收及吸收曲线 三、光的吸收定律 透光度(透光率)T 2.摩尔吸光系数ε(比例常数)讨论 （1）吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数； （2）不随浓度c和光程长度b的改变而改变。在温度和波长等条件一定时，ε仅与吸收物质本身的性质有关,与待测物浓度无关； （3）可作为定性鉴定的参数； （4）同一吸收物质在不同波长下的ε值是不同的。在最大吸收波长λmax处的摩尔吸光系数，常以εmax表示。εmax表明了该吸收物质最大限度的吸光能力，也反映了光度法测定该物质可能达到的最大灵敏度。 （7）标准曲线的绘制及应用 配制一系列已知浓度的标准溶液，在一定条件下进行测定。然后以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标作图，得到一条标准曲线，也称做工作曲线。曲线的斜率为εb，由此可得到摩尔吸收系数ε；也可根据未知液的Ax,在标准曲线上查出未知液的浓度Cx。 3.偏离朗伯—比耳定律的原因 标准曲线法测定未知溶液的浓度时发 现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶 液浓度较高时），这种现象称为对朗 伯—比耳定律的偏离 引起这种偏离的因素（两大类）: （1）物理性因素，即仪器的非理想引起的； （2）化学性因素。 （1）物理性因素 a.难以获得真正的纯单色光 b.介质不均匀性引起的偏离 (2) 化学性因素(溶液的化学变化而引起的偏离) 一、基本组成 2.单色器 3. 样品室（比色皿） 分光光度计仪器的校准 1、波长的校准 2、吸光度的校正 3、杂散光的校正 4、比色皿的校正 可见分光光度计使用的注意事项 （1）每台仪器所配套的比色皿，不能与其他仪器的比色皿单个调换。 （2）为确保仪器稳定，在电压波动较大时，应将220V电源预先稳定。 （3）当仪器工作不正常时，如数字显示无亮光、光源灯不亮时，应检查仪器后盖保险丝是否损坏，然后检查电源是否接通，再查电路。 （4）每次使用结束后，应仔细检查样品室内是否有溶液溢出，若有溢出随时用滤纸吸干，否则会引起测量误差或影响仪器使用寿命。 （5）每周要检查一次仪器内部干燥筒内防潮硅胶是否已经变色，如发现已变为红色，应及时取出调换或烘干至蓝色，待冷却后再放入。 比色皿使用的注意事项 （1）取拿比色皿时，应用手捏住比色皿的毛面，切勿触及透光面，以免透光面被玷污或磨损。 （2）被测液以倒至比色皿的约3/4高度处为宜。 （3）在测定一系列溶液的吸光度时，通常都是按从稀到浓的顺序进行。使用的比色皿必须先用待测溶液润洗2-3次。 （4）比色皿外壁的液体应用吸水纸吸干。 （5）清洗比色皿时，一般用水冲洗。如比色皿被有机物沾污，宜用盐酸-乙醇混合液浸泡片刻，再用水冲洗，不能用碱液或强氧化性洗涤液清洗，也不能用毛刷刷洗，以免拐伤比色皿。 显色反应的要求 显色反应条件的选择 共存离子干扰的消除 测定条件的选择 最佳读数范围与最佳值 参比溶液的选择一般遵循的原则： * * 基于物质光化学性质而建立起来的分析方法称之为光化学分析法。 分为:光谱分析法和非光谱分析法。 光谱分析法是指在光（或其它能量）的作用下，通过测量物质产生的发射光、吸收光或散射光的波长和强度来进行分析的方法。 在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法,主要有: 红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围2.5?1000 ?m ,主要用于有机化合物结构鉴定。 紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围200?400 nm（近紫外区） ，可用于结构鉴定和定量分析。 可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围400?750 nm ，主要用于有色物质的定量分析。 分子结构的复杂性使其对不同波长光的吸收程度不同；溶液 之所以呈现不同的颜色.是与它对光的选择性吸收有关 溶液的颜色由透过光的波长所决定 光的互补：蓝?? 黄 绿 黄 青 橙 白光 青蓝 红 蓝 紫红 如果让一束白光通过