复方鳖甲软肝方药物血清对大鼠离体肝星形细胞作用机理研究中西医结合基础组织学专业论文.docxVIP

主茎塑兰 主茎塑兰 一——一—— 复方鳖甲软肝方药物血清对大鼠离体肝星形细胞 作用机理研究 中文摘要 肝纤维化是诸多慢性肝病的基础病理改变。肝纤维化的机制为细胞外基 质【extracelluarmatrix，ECM)的合成与降解失衡，导致ECM过度沉积所致。 肝纤维化进一步发展即肝硬化。此时，肝的正常组织结构已被破坏，进一步 发展，肝中央静脉周围和汇管区出现小叶间隔，形成假小叶，即可出现肝功 能障碍。因此，积极防治肝纤维化的发生，无论从延缓或阻断肝硬化的形成， 还是逆转肝纤维化病理进程，均具有十分重要的意义。 近年来，大量资料表明，肝星形细胞(hepatocyte stellate cells，HSC) 是肝脏主要产生ECM的细胞，也是各种病因导致肝纤维化发生的共同中心环 节。HSC活化是产生胶原的关键环节。HSC活化后，可出现细胞性状和细胞 功能的改变。最突出的表现为EcM的合成与降解的失衡。HSC的活化可分为 活化启动和活化持续两个阶段。HSC的活化依靠于细胞内信号转导的同时， 还与核转录因子的调节密切相关。目前以HSC为靶向治疗肝纤维化的主要措 施包括：①去除病因，减轻肝脏炎症，间接抑制HSC的活化；②选择性阻止 HSC合成ECM；③促进HSC对ECM的降解④促进过剩的HSC凋亡，减少 其数量。 目前，西医对肝纤维化的治疗主要集中在防止肝损伤、抗炎、干预细胞 内信号转导通路、拮抗促纤维化细胞因子作用、抑制胶原合成(转录水平或 翻译水平)、促进胶原降解和促进HSC凋亡等多个方面。 中医药对肝纤维化的治疗通常采用是活血化瘀、益气养阴、软肝散结、清 热利湿和调理肝脾等治则。本实验采取的复方鳖甲软肝方由鳖甲、党参等十 一味中药组成。其功能为：扶正祛邪，活血化瘀。扶正：党参健脾益气，紫 河车益肾填精。驱邪：板蓝根清热解毒。活血化瘀：鳖甲，入肝、肾经，既 可欺坚散结，又可滋阴潜阳。当归养血活血，莪术行气祛瘀。其临床有效率 达81．67％，治愈率达55．23％。本方系国家级中药新药(批准文号：国药准字 1999，2-102号)已上市。本研究拟采用复方鳖甲软肝方药物血清对大鼠离体 肝星形细胞作用机理开展实验研究。目的在于避一步深入了解复方鳖甲软肝 方药物血清对HSC的增殖，活化以及对ECM降解和合成的影响。此外，本 研究还从活化的HSC细胞内信号转导及核转录因子方面探讨复方鳖甲软肝方 对HSC活化所产生的影响。 ! ! 墨查兰!塾堑垄苎塑圭堕苎查璺曼堡堑燮些堡旦生坚墅堕 1．复方鳖甲软肝方药物血清对HSC增殖影响的实验研究 本实验从离体的角度观察复方鳖甲软肝方药物血清对肝星形细胞(HSC)增 殖的影响，以探讨其抗肝纤维化的作用机制。研究表明，肝纤维化是一种常 见的慢性进行性肝病，肝星形细胞的活化增殖以及细胞外基质(ECM)的沉 积是肝纤维化的两个重要环节。肝星形细胞的大量增殖，可以合成过多的胶 原、蛋白多糖等ECM成分，与肝纤维化的发生、发展过程密切相关。本实验 结果显示，不同剂量的复方鳖甲软肝方药物血清作用48 h、72 h均可抑制肝 星形细胞的增殖，尤以高、中剂量组明显，提示复方鳖甲软肝方药物血清抑 制肝星形细胞增殖的药物效应与药物浓度呈量效依赖关系，其机制可能与药 物中的有效物质能阻止HSC分泌血小板衍生生长因子(PDGF)和阻止HSC 已分泌的PDGF与HSC受体结合有关，从而起到抑制肝星形细胞的活化增殖， 达到治疗肝纤维化的作用。而培养24h，各组无显著性差异，提示HSC的增 殖需要一个从接受细胞信号刺激活化到HSC增殖数量发生显著变化的时间过 程，从本实验结果提示，该时间过程无疑要大于24h。因此，如何在早期通过 抑制HSC的增殖途径达到遏止HSC的迅速增殖，无疑具有重要的临床意义。 与本室以往活血化瘀方药物血清的MTT实验结果相比，培养48h、72h，复方 鳖甲软肝方药物血清与活血化瘀方药物血清均可显著抑制肝星形细胞的活化 增殖，表明复方鳖甲软肝方药物血清与活血化瘀方药物血清均能抑制肝星形 细胞的增殖。 2．复方鳖甲软肝方药物血清对HSC活化影响的实验研究 本实验采用免疫组化技术观察复方鳖甲软肝方药物血清对肝星形细胞 (HSC)中c【一SMA、desmin、突触素表达的影响，以探讨其抗肝纤维化的作 用机制。研究表明，肝星形细胞的活化是肝纤维化的中心环节。活化的主要 特征包括肝星形细胞中Ⅸ一SMA、desmin和突触素的表达，本实验结果显示在 时间上desmin、突触素的表达早于oc。SMA的表达。突触素作为一种较新的 HSC活化指标，可通过自分泌、旁分泌等方式参与肝纤维化发生、发展过程。 并为肝纤维化的发生发展过程中神经调节的参与提供了指标依据。实验结果 还显示，复方鳖甲软肝方药物血清作用24h、48h、72h均可显著