《SNT1087-2002-牛Q热微量补体结合试验操作规程》.pdfVIP

牛Q热微量补体结合试验 操作 规程 Procedure of micro complement fixation test for bovine Q fever SN/T 1087— 2002 前 言 本标准按照GB/T 1.1— 1993 《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》的要求，对原《中华人民共和国 进出境动物检疫规程手册》(1997年12月)中的 “牛Q热微量补体结合试验” 进行修订。 本标准的附录A是标准的附录。 本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、广州出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：柯忠哲、朱世强、林志雄、张立怀、范华炜。 本标准系首次发表的检验检疫行业标准。 1范围 本标准规定了牛Q热微量补体结合试验的操作技术要求。 本标准适用于牛、羊Q热微量补体结合试验抗体的检测，其他哺乳动物可以参照本标准。 2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都被修订，使用本标准的各 方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB/T 6682— 1992分析实验室用水规格和试验方法 3器材及试剂 3.1器材 3.1.1 微量板：U型底96孔板。 μ μ μ μ 3.1.2 加样器：8道5 L～50 L可调式移液器，10 L～750 L可调式移液器。 3.1.3 各种规格塑料滴头、刻度玻璃吸管、试管、试管架。 3.1.4 离心机：低速，使用水平转子。 3.1.5 水浴锅：可调节温度。 3.2 试剂 3.2.1 抗原：按说明保存和使用。 3.2.2 标准抗原：按说明保存和使用。 3.2.3 标准阳性血清：按说明保存和使用。 3.2.4 标准阴性血清：按说明保存和使用。 3.2.5 被检血清：从被检动物静脉采血，分离血清，4℃保存。 3.2.6 补体：按说明保存和使用。 3.2.7 溶血素：按说明保存和使用。 3.2.8 试验用蒸馏水为GB/T 6682中的三级水。 4预备试验 4.1 2%绵羊红细胞悬液：采成年绵羊血，一份血加1.2倍量的阿氏液，混匀，4℃保存，5 d后备用。使用前摇匀，取出10 mL，用离心机以2 000 r/min离心5 min，弃去上清液，将下沉的红细胞泥用20倍量巴比妥缓冲液 (VBD)洗涤，以2 000 r/min离心5 min，重复洗涤三次，最后一次离心10 min。取下沉的红细胞泥用VBD配制成2%(V/V)悬液。 4.2 溶血素效价的测定 4.2.1溶血素的稀释：取溶血素0.1 mL加VBD 9.9 mL混匀 (如果是等量甘油保存的溶液，取溶血素0.2 mL加VBD 9.8 mL)，制成100倍稀释的溶血素，再 按表1稀释成不同倍数。 表1 溶血素的稀释表 1 2 3 4 5 6 7 8 9 500 1 000 1 500 2 000 2 500 3 000 4 000 5 000 6 000 1 ∶100溶血素/mL 0.2 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 VBD/mL 0.8 0.9 1.4 1.9 2.4 2.9 3.9 4.9 5.9 总量