《SNT1151.2-2002-对虾白斑病毒(WSV)聚合酶链式反应(PCR)检测方法》.pdfVIP

SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1151.2-2002 对虾白斑病毒(wsv) 聚合酶链式反应(PCR)检测方法 Testmethodofpolymerasechainreaction(PCR) forwhitespotvirus(WSV) 2002一11一25发布 2003一05一01实施 中 华 人 民 共 和 国 发 布 国家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 SN/T 1151.2-2002 前 言 本标准是在参考国际上通用的检测规程和总结我国在这一领域的实践经验的基础上制定的。 本标准的附录A是资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。 本标准主要起草人:刘药、史秀杰、高隆英、江育林。 本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T 1151.2-2002 对虾白斑病毒(WSV) 聚合酶链式反应(PCR)检测方法 范 围 本标准规定了用聚合酶链式反应技术((PCR)检测对虾白斑病毒(WSV)的方法。 本标准适用于对虾白斑病毒的鉴定，适用于本病的流行病学调查、诊断、检疫和监测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注 日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法(eqvISO3696:1987) 试剂和材料 3.1 水 应符合GB/T6682-1992中一级水的规格。用于PCR(包括核酸抽提)时所用的水要用DEPC 处理。 3.2 Taq酶 一20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化。 3.3 dNTP(含dCTP,dGTP,dATP,dTTP各 10mmol/L) 引物浓度为40pmol/L。有两对引物，使用时浓度皆为401smol/L，其序列分别为: 146F1;5-ACTACTAACTTCAGCCTATCTAG3; 146R1:5-TAATGCGGGTGTAATGTTCTTACCA-3，扩增1447饰的片段; 146F2:5-GTAACTGCCCCTTCCATCTCCA-3; 146R2:5-TACGGCAGCTGCTGCACCTTGT-3，扩增上述片段中的941by片段。 3.4 无水乙醇 分析纯，使用前预冷到一200C. 3_5 矿物油 无 DNA酶和 RNA 酶。 仪器和设备 4.1 PCR扩增仪 4.2 电泳仪 4.3 微量移液器和吸头 4.4 紫外观察灯 4.5 恒温培养箱 4.6 普通冰箱和低温冰箱 SN/T 1151.2-2002 4.7 电动匀浆器 4.8 离心机和离心管 4.9 剪刀 4.10 摄子 白斑病毒DNA的鉴定 5，1 采样 取活虾和活虾的头部，立即处理或放在95%酒精中(可在常温下保存30d,样品处理前必须让酒精 完拿挥发。取50mg-100mg的鳃丝(或上皮、肝胰腺和肠)，放在1.5mL的离心管中。 5.2 样品处理 在15℃下，首先加人150pLCTAB溶