短帚霉的形态学观察及致病性的动物实验研究皮肤病与性病学专业论文.docxVIP

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短帚霉的形态学观察及致病性的动物实验研究皮肤病与性病学专业论文

河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则, 承担相应的法律责任。 研究生签名哆王蕞媛导师签名:‘而谛弓,Ej学院领导签名: zg El 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他入已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负。 研究生签名:涉毒哦导师签名:‘西 ∥。貉乡月习El 中文摘要短帚霉的形态学观察及致病性的动物实验研究 中文摘要 短帚霉的形态学观察及致病性的动物实验研究 摘 要 目的:短帚霉(Scopulariopsis brevicaulis)是一种腐生性条 件致病真菌,通常引起甲真菌病,较少引起其他部位的感染, 但目前国外已经有关于深部组织感染的报道。此菌分离于我 科门诊病人,经中国医学科学院微生物研究所鉴定为 Scopulariopsis brevicaulis。 本研究一方面通过对短帚霉形态学观察,进一步了解短 帚霉的形态学特征与产孢方式,为临床上诊断短帚霉病提供 指导;另一方面,通过动物实验检测其引起系统性感染的可 能性,并且观察不同免疫状态下动物的死亡情况,同时对自 然死亡和分期处死的小鼠进行解剖,通过镜检、组织逆培养、 组织病理学检查、组织载菌量测定等方法比较各脏器的感染 程度。为进一步了解此菌的致病力和引起的病理形态学改变 提供实验室依据。 方法: 1 DNA序列分析 提取分离菌DNA,PCR扩增其 26SrDNA近5’端D1/D2区域,在DNA自动测序仪上进行直 接双向测序确定碱基位点,通过GenBank/EMBL/DDBJ/PDB 核酸序列数据库进行同源序列检索,通过系统树显示其亲缘 关系。 2菌株的形态学观察 2.1大体菌落观察将我科保存菌株复温24h,转种于 SDA培养基上, 37℃和27℃温箱培养,每天观察菌落的生 中文摘要长情况。 中文摘要 长情况。 2.2光镜观察取其菌落标本置于载玻片上,lO%KOH 溶液溶解后,盖上盖玻片,光镜下观察。 2.3扫描电镜观察取两个温度下培养10天的菌落标 本,置于4%的戊二醛中固定,常规制片后在扫描电镜下观 察。 3动物的致病性试验 3.1短帚霉系统感染动物模型的制作 将保存菌株复 温,转种于SDA培养基上27℃培养10天。用无菌生理盐水 制备成菌悬液,通过皮下、腹腔、静脉三种途径接种至不同 免疫状态的小鼠。 3.2死亡率的观察 连续观察各组小鼠感染该菌后四周 内的自然死亡情况,记录死亡日期和死亡只数。 3.3感染内脏的大体观察将不同感染时间的动物解剖. 分别取出心、肝、脾、肺、肾,观察各脏器是否肿大或萎缩、 有无颜色变化等。 3.4直接镜检 肉眼可见感染灶的脏器取脓灶处小块组 织,压碎后于光学显微镜下直接镜检。 3.5组织逆培养各脏器用组织研磨器研碎后挑取少许 分别接种于沙堡氏试管培养基,27℃温箱培养,观察菌落的 生长情况,然后挑取菌落制成湿片在光学显微镜下观察菌丝 及孢子形态。 3.6组织病理学检查取各脏器表面肉眼可见病理改变 组织,用10%福尔马林溶液常温固定,常规脱水、透明、包 埋、切片,HE和PAS染色,光镜下观察组织病理学变化。 3.7肾脏载菌量(CFU)的测定单侧肾脏用组织研磨器 中文摘要研碎后,加无菌生理盐水lml混匀,取lOIrtl组织悬液均匀涂 中文摘要 研碎后,加无菌生理盐水lml混匀,取lOIrtl组织悬液均匀涂 布于平皿培养基表面,27C温箱中培养,48小时后读取平皿 表面的菌落数。 结果: 1 DNA序列分析结果基于26SrDNA D1/D2区序列和 Neighbor-Joining分析绘制的系统树,示该菌株与 Scopulario[brevicauli!Scopulariopsis brevicaulis是近缘种的关系。楚逝琢柙嗣天系。 2大体菌落观察培养3--.,4天,菌落开始生长,初为 白色膜样菌落,生长迅速,以后变为灰褐色。 3光镜下观察可见分枝分隔菌丝,帚状枝,分生孢子 自环孢子梗长出一串,呈球形,壁厚,表面光滑或粗糙。 4扫描电镜观察 可见帚状枝,菌丝末端或侧面着生球 形的分生孢子。 5动物模型腹腔和静脉注射途径感染小鼠,真菌培养 阳性,组织病理学检查可见大量菌丝和少数的孢子。皮下接 种各脏器真菌培养和组织病理学改变均呈阴性。 6自然死亡情况 免疫抑制

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