产朊假丝酵母发酵法生产谷胱甘肽研究(ppt).pptVIP

1 江南大学生物工程学院 2 有关谷胱甘肽的基本知识  生物活性三肽化合物  小分子硫醇类化合物  含有- 肽键  主要有还原型（GSH）和氧化型（GSSG）两种形态 3 谷胱甘肽的形态转换 图1-1 酵母细胞中谷胱甘肽的形态转化过程 4 谷胱甘肽在自然界中的分布情况 动物：肝脏、肾、红细胞和眼睛晶状体 植物：蔬菜、豆类、谷物、薯类、菇类 微生物：酵母 （主要为Saccharomyces属和Candida属） 谷胱甘肽主要以GSH形式存在，大多数生物细胞中GSH与GSSG的比例约为100 : 1 。 5 谷胱甘肽的功能  维持生物体内适宜的氧化还原环境  广泛用于生物化学、医学、生物学和化学的研究测定  GSH可以迅速增强机体的免疫力  对消化系统、呼吸系统和新陈代谢等都有很大帮助  GSH具有消除疲劳的作用  近年来还发现GSH具有抑制艾滋病病毒的功效 加拿大麦基尔大学教授古特曼博士这样预测：“GSH很快 就会象胆固醇一样深入民心，成为人们衡量健康的指标之一” 。 6  GSH多用于治疗肝脏疾病  解毒  抗辐射  抗肿瘤、癌症  抗氧化衰老  协调内分泌 疗效明显且无副作用，这些同类药物所不具有的优点 使得GSH在临床医药领域有着极为广泛的用途。 谷胱甘肽应用于临床 7 表1-1 GSH的生理功能及其在临床上的应用 8 谷胱甘肽应用于食品行业  GSH具有独特的生理功能，被称为长寿因子和抗衰老因子  GSH在强化食品风味的同时对人体有保健作用  它在食品行业的应用前景显然要优于其它类型的防腐剂或抗氧化剂 表1-2 GSH在食品加工业中的用途 9 谷胱甘肽的应用前景 医药工业 食品工业 体育运动 生物研究 昂贵的市场价格 GSH在各领域中的广泛应用 限制 10 谷胱甘肽的制备方法  有机溶剂萃取法  化学合成法  生物技术法  酶转化法  发酵法 11 酶法合成谷胱甘肽 谷胱甘肽合成酶系酶活的提高 ATP再生系统的构建 E. coli 细胞中的乙酸激酶反应 S. cerevisiae 细胞中的糖酵解途径 固定化酶（细胞）技术的应用 提高ATP的转移效率以及增加ATP在反应体系中的稳定性，以实现 ATP再生系统的高效运行。 12 发酵法生产谷胱甘肽 高产菌株的选育 发酵过程的优化及控制 基因工程菌在谷胱甘肽生产中的应用 13 高产菌株的选育 图1-3 高产GSH酵母菌株的选育方法与结果 14  发酵条件优化 营养成分的选择 培养条件的优化  发酵过程控制 控制葡萄糖的浓度：流加发酵 控制细胞比生长速率：提高比GSH合成速率  前体物质的添加 添加策略：一次性添加、连续添加等 发酵过程的优化及控制 15 基因工程技术的应用  提高GSH合成酶系的酶活：增加质粒的拷贝数  降低酶系对GSH的敏感性：构建脱敏菌株 ！需要考虑质粒的稳定性 ！ 16 发酵法生产谷胱甘肽研究中仍存在的问题  对C. utilis发酵生产GSH的细胞生长规律和GSH合成特性还缺乏了解  还没有发现从发酵动力学的角度，来分析并获得GSH发酵过程中出现的 规律性结果  在流加发酵中，高细胞密度和高GSH合成能力的矛盾还没有解决  未见运用代谢理论及其手段为GSH合成过程中发生的变化寻求合理的解释  如何将胞内GSH分泌至胞外也需要深入研究 17 发酵法生产谷胱甘肽研究的意义  日本协和发酵和味之素公司在上世纪80年代就已实现GSH的 工业化生产，并基本垄断国际市场  我国在该方面的研究相对滞后  日本以明显的差价将GSH销往欧美和我国（欧美250美元/kg，我国450美元/kg） 因此，大力研制开发并获得具有自主知识产权的GSH生产 技术，对于我国功能食品和医药工业的发展都具有重要的意义。 18 发酵过程优化原理 外因：基于微生物反应原理的培养环境优化技术 内因：基于代谢特性的分阶段培养技术 外因定量化：基于动力学模型分析的优化和控制技术 内因定量化：基于代谢通量分析的过程优化技术 19 微生物细胞 基于微生物反应原理的培养环境优化技术 (外因） 创造一个适于微生物生长和代谢的环境 关键技术 1 在一个生物反应体系中 20 基于代谢特性