肠道病毒71型致神经系统感染的影响因素初步分析公共卫生专业论文.docxVIP

fliraIIIIIIUI fliraIIIIIIUI JillIlIM IIf 硕士学位论文 Y31 1 7094 肠道病毒7 1型致神经系统感染的影响因素 初步分析 硕士研究生：钟艳云 指导教师：吴娴波教授 张宝教授 摘要 一、 研究背景和目的 肠道病毒71型(Human Enterovirus 71，简称EV71)属于小核糖核酸病毒 科、肠道病毒A属，是引起婴幼儿手足口病(Hand Foot Mouth Disease，HFMD) 的主要病原体之一，其感染常引起儿童手足口病、疱疹性咽峡炎等较轻的临床 症状。然而，越来越多的报道揭示EV71的感染可引起严重的神经系统综合征， 包括无菌性脑膜脑炎、脑干脑炎、脊髓灰质炎样麻痹、神经源性肺水肿，严重 者甚至死亡。自从1969年首次在美国加利福尼亚州分离该病毒，此后在保加利 亚、马来西亚、新加坡、日本、越南、中国均引起过大规模流行。据广东省卫 计委5月17日发布的手足口病预警信息，截止5月16目，全省今年共报告手 足口病88366例，其中死亡3例，较2015年同期病例数(51327例)上升72％， 以EV71病毒致死率最高。作为手足口病的主要病原之一，EV71已经成为目前 全球范围内取代脊髓灰质炎病毒，对公共卫生安全威胁最严重的中枢神经毒性 病原。因此，探讨EV71致神经系统感染的影响因素对EV71的防治意义重大。 从分子生物学的角度来看，EV71为RNA病毒，在复制过程中缺乏核酸外 切酶的校对功能而导致较高的出错率，约每复制一个基因就有一个自发突变。 VPl区由于其高度多样性和较少参与重组而被认为是肠道病毒进化研究中最有 万方数据 摘要意义的基因区域。有研究表明，VPl的变异与神经系统的感染可能存在相关关 摘要 意义的基因区域。有研究表明，VPl的变异与神经系统的感染可能存在相关关 系，决定EV71神经毒性可能是单一位点的突变，也有可能是多个位点突变共同 作用的结果。有研究在分析具有神经毒性的EV71分离株时发现，VPl上有一个 重要的氨基酸变异Alal70Val(丙氨酸170颉氨酸)，猜测该变异使得病毒蛋白 结构发生变化，改变了病毒与受体的结合能力。然而，此研究只是基于少量的 样本发现的突变位点，突变位点少，且突变的位点对人群发病的影响有多大意 义并不清楚。因此，我们旨在通过更大样本的人群来筛选，以验证VPl蛋白变 异是否与EV71神经系统感染有关。 此外，一项关于大脑组织TLR．5和TLR一6受体的表达与EV71感染致神经 系统损伤的研究发现，脑组织病毒受体的高表达与神经系统损伤有关。另有研 究也证实EV71受体对于病毒感染细胞和组织至关重要。病毒进入细胞的第一步 便是与细胞表面的病毒受体结合，病毒进入细胞的主要途径通过病毒受体介导 的RNA释放或者胞吞作用，因此猜测病人自身的受体数量、病毒蛋白与受体的 相互作用可能也与神经系统的感染有关。 目前已知的EV71的受体有：P-selectin glycoprotein ligand-1(PSGL—1)、 Human scavenger receptor class B2(SCARB2)，Vimentin(VIM)。近年来，越来越 多研究报道了VIM在病原体吸附、胞吞、迁移过程中的重要作用。VIM是新近 发现的EV71受体，在人脑微血管细胞中表达丰富并介导大肠杆菌细菌侵袭， EV71感染与相类似。因此猜测EV71通过VIM受体介导进入人脑微血管内皮细 胞而感染神经系统。根据已有文献报道我们提出：EV71病毒的变异和患者自身 受体的差异可能是影响EV71感染神经系统的因素，二者或独立作用或存在交互 作用。 本文主要从广东省2008年～2010年EV71的流行病学分析、VIM在EV71 感染HBMEC中的作用两方面来探究EV71所致神经系统的影响因素，以确定 EV71病毒VPl蛋白的A289T变异，以及VIM受体与EV71神经系统感染的关 Il 万方数据 硕士学位论文系；并明确EV71病毒感染血脑屏障细胞是神经系统感染的一条重要途径。本研 硕士学位论文 系；并明确EV71病毒感染血脑屏障细胞是神经系统感染的一条重要途径。本研 究不但有助于分析EV71的流行病特征、病毒变异情况；也将为EV71病毒的神 经系统感染建立有意义的预警信号，及早发现易感人群，及时采取有效的防范 措施，对于减少神经系统感染的发病率具有重要的意义。 二、 研究方法 1．广东省2008--2010年EV71的流行病学分析 收集2008～2010年广东省多个市区送至广东省疾病预防控制中心检验的样 本(包括粪便、咽拭子、脑脊液等)，采用荧光定量PCR技术和病毒分离培养技 术确诊为EV71感染的共194例样本。根据症状的差异分成EV71神经系统感染