葛根素诱导血管生成的作用及分子机制研究中药学专业论文.docxVIP

Y1007807成都中医药大学溥士学位论文 Y1007807 成都中医药大学溥士学位论文 中文摘要 目的：研究葛根素诱导血管生成的作用及其分子机制。 方法：分别采用体外培养大鼠胸主动脉环模型和心肌梗死大鼠模型，应用显微镜 记数的方法，测定培养大鼠胸主动脉环的血管生成情况；用TTc染色的方法测 定心肌梗死面积；免疫组化的方法检测心肌微血管密度(MVD)；分光光度法检 测血清NO的水平；RT-PCR的方法检测心肌HIF．1、VEGF、eNOS mRNA的 表达；Western．Blot的方法检测心肌eNOS、iNOS、AKT、p-AKT蛋白表达。 结果：①葛根素有明显的抗，Ii肌缺血的作用，60～120mg／kg葛根素腹腔注射四 周能明显缩小大鼠心肌梗死面积。②葛根素能明显诱导血管生成：实验表明， 6．25～100mg／mL葛根素均能促进体外培养大鼠胸主动脉环血管生成作用； 120mg／kg葛根素腹腔注射四周能明显增加心肌梗死大鼠缺血心肌和非缺血心肌 的微血管密度。③葛根素诱导血管生成的作用主要与其激活 HIF．VEGF．AKT。eNOS．NO信号转导机制有关，主要表现在以下几个方面：a RT-PCR结果显示增加心肌梗死大鼠心肌HIF一1、VEGF、eNOS mRNA表达； b Western-Blot结果显示增加心肌梗死大鼠心肌eNOS蛋白表达和AKT磷酸化水 平的蛋白表达；c增加心肌梗死大鼠血清NO水平。 结论：葛根素在体内外试验中均有诱导血管生成作用，这可能是葛根素抗心肌缺 血作用的重要机理，葛根素诱导血管生成作用的分子机制与其激活 HIF-VEGF．AKT．eNOS—NO信号转导通路有关。 关键词：血管生成 葛根素心肌梗死 分子机制 成都中医药大学博士学位论文 成都中医药大学博士学位论文 Abstract objective：To investigate the effect and molecular mechanism of puerarin On angiogenesis． Methods：Using ral aortic ring assay and rat myocardial infarction model．the growth of microvessels was observed by counting the number of newly formed microvessels using microscope．Immunohistochemistry staining was used to examine myocardial microvessel density(MVD)．Spectrophotometry WaS used to examine serum nitric oxide levels．’The gene expression of myocardial HIF·1，VEGF and eNOS was examined by RT-PCR．Western—Blot was applied to detect the protein expression of myocardial eNOS、iNOS、AKT、P—AKT． Results：①Puerarin was shown to have protective effect Oil myocardial isehemia， Puerarin(1 20，60mg／kg，i．p．)could reduce the infarct area in the heart of rat with myocardium infarction．②Puerarin could induce angiogenesis．Puerarin at concentrations from 6．25 to 1 00mg／mL could induce angiogenesis in the culture ofrat aortic rings．Puerafin(120mg／kg，i．p．)induced angiogenesis in ischel．tic and non-ischemic myocardium of rats with myocardial infarction．③The effect of puerarin on angiogenesis was realized through HIF—VEGF—AKT··eNOS-NO sigcaa] pathways shown below：a)Puerarin could increase the gene expression ofmyocardial HIF一1，VEGF an