姜黄素对匹罗卡品致痫鼠海马神经元保护作用的研究人体解剖与组织胚胎学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 ·英文缩略语 ·英文缩略语· 中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工 中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同 工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并 表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：—扯日期： 掷-j-．伽 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究 生在攻读学位期间论文X-作的知识产权单位属中国医科大学。本人保 证毕业离校后，发表论文或使用论文X-作成果时署名单位为中国医科 大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学 校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许 论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密 内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。 论文作者签名：丝 指导教师签名： 丛 日 期：塑堕：!：竺 ·中文论著摘要 ·中文论著摘要· 姜黄素对匹罗卡品致痫鼠海马神经元 保护作用的研究 目 的 癫痫是人类常见的脑损伤性疾病，约有40％的人类癫痫起源于人脑颞叶故称 为颞叶癫痫。颞叶癫痫主要以海马病变为主，这可能与海马结构独特的神经元环 路及纤维联系有关。这种颞叶癫痫的持续状态会导致神经元和星形胶质细胞中谷 氨酸浓度的病理性升高，而这种兴奋性氨基酸的水平升高会介导和增强氧化应激 反应。在神经系统中海马神经元比其它区域的神经元抵抗这种氧化应激反应损伤 的能力要弱得多，因此海马神经元成为颞叶癫痫模型中最敏感的部位，故颞叶癫 痫患者常伴有海马神经元的损伤甚至丢失。研究表明癫痫72小时后引起海马神经 元的丢失主要以细胞凋亡为主。姜黄素是一种从姜科植物Curcuma longa的根茎姜 黄中提取的一种植物多酚，有抗氧化、抗炎、抗凝、抗肿瘤、抗突变等多方面的 药理作用。有文献报道对海人酸诱导癫痫的实验动物提前注射姜黄素，能减轻海 人酸诱导癫痫所造成的海马神经元的损伤程度，从而减轻海马神经元的死亡。本 实验的目的是研究姜黄素对匹罗卡品癫痫模型小鼠海马神经元凋亡的影响。 材料与方法 一、实验分组 CD．1小鼠，雌雄并用，共32只，体重18—229，随机分为4组，每组8只。 l、第一组为对照组(Ctl) 2、第二组为锂．匹罗卡品诱导癫痫组(Pil) 3、第三组为提前1 8小时预注姜黄素的癫痫组(Cur+Pil) 4、第四组为单纯注射姜黄素动物组(Cur) 二、癫痫行为学观察CD 二、癫痫行为学观察 CD．1小鼠腹腔注射锂．匹罗卡品诱导癫痫，成模后观察其行为学变化，参考 Simialowski 6级(0．V)评定法。 三、组织切片的制备 成模鼠于锂一匹罗卡品诱导癫痫72小时后腹腔注射4％戊巴比妥钠麻醉动物， 然后用蠕动泵经左心室灌流，取大脑，部分标本置于30％蔗糖液4C冰箱保存过夜， 制备10la m的冰冻切片，部分标本常规制成7u m的石蜡切片。10la m冰冻切片做 甲酚紫染色，7 la m的石蜡切片做TUNEL染色，凋亡因子Caspase一3和Caspase一9 原位杂交的检测。 四、染色 1、甲酚紫染色法 10I．tm的冰冻切片采用甲酚紫染色法染色。切片空气中晾干后常规染色lO分 钟，冲洗后酒精梯度脱水，透明，封固，镜下观察。 2、TUNEL染色 TUNEL染色采用的是试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)，严格按照说明 书操作，切片经常规脱蜡，胃蛋白酶消化，滴加反应液201xl，然后滴加反应终止 液，抗地高辛过氧化物酶抗体，最后DAB显色，封片镜下观察。 3、凋亡因子的检测 凋亡因子Caspase-3和Caspase．9的检测采用试剂盒，按照说明常规脱蜡至水， 灭活内源性过氧化物酶，胃蛋白酶消化然后PBS冲洗，经过预杂交，杂交后 洗，SABC37*C20分钟，生物素过氧化物酶室温30分钟，冲洗后DAB显色。 2 结果：口 结果：口7K 一、行为学观察结果 提前18dx时注射姜黄素后诱导癫痫的实验动物组(Cur+Pil)和癫痫动物组(Pil) 动物在诱导癫痫72dx时后，均出现典型的癫痫大发作Ⅳ级．V级不等并有部分动物 出现癫痫持续状态甚至自发性癫痫，而在对照组(Ctl)和单纯注射姜黄素组(C岫没 有发生癫痫。 二、姜黄素对癫痫动物海马神经元的保护作用 1、甲酚紫染色检测姜黄素对癫痫动物海马神经元的保护作用 在甲酚紫染色的切