肠球菌中βd葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究生物化工专业论文.docxVIP

.飞 φ --…… A A Thesis Submitted for the Application of the Master’S Degree of Engineering Purification and Characterization of ≯．t p—D-Glucosidase in Enterococcus faecium Candidate： Zhang Haozhong Specialty： Biochemical Engineering Supervisor： Associate professor Liu Tongjun — Shandong Institute of Light Industry,Jinan，China June，2010 . r 守￥ ‘ 导师签名：堑1逮丝 导师签名：堑1逮丝 日期：业卫一年』月粤同 ◆ 毫 r w. φ 一--… 山东轻r业学院硕fj学位论文目 山东轻r业学院硕fj学位论文 目 录 摘 要 I ABSTRACT 一I 第1章绪论 1 1．1 银含提取物 1 1．1．1银杏提取物有效成分 1 1．1．2银杏提取物的临床应用 2 1．1．3银杏提取物的毒副作用 4 1．1．4银杏提取物有效成分分析方法 4 1．1．5银杏提取物展望 ．4 1．2肠球菌 4 1．2．1肠球菌的分类 4 1．2．2肠球菌的生物学性质 5 1．2．3肠球菌的致病机理 6 1．2．4常见的肠球菌感染与疾病 一6 1．2．5肠球菌的治疗 7 1．2．5益生肠球菌的展望 7 1．3 B—D一葡萄糖苷酶 8 1．3．1 B—D一葡萄糖苷酶的来源 ．8 1．3．2 B—D一葡萄糖苷酶的理化性质 8 1．3．3 B—D一葡萄糖苷酶的催化机制 ．9 1．3．4 B—D一葡萄糖苷酶的提取、分离纯化及酶活测定方法 一lo 1．3．5 B-D-葡萄糖苷酶的应用 11 1．3．6 B—D一葡萄糖苷酶展望 。13 1．4研究内容与意义 13 第2章肠球菌培养条件优化研究 15 2．1材料与方法 一15 2．1．1实验材料 15 2．1．2方法 ．．17 2．2结果与讨论 ．18 2．2．1测定肠球菌的生长曲线 18 H录2．2．2单因素实验 H录 2．2．2单因素实验 19 2．2．3 Plackett—Burman实验设计 ．22 2．2．4最陡爬坡实验 23 2．2．5响应面(RSM)实验设计 24 2．3小结 28 第3章肠球菌13-D-葡萄糖苷酶活力测定条件的研究 29 3．1材料与方法 29 3．1．1材料与试剂 29 3．1．2方法 一30 3．2结果与分析 3l 3．2．1对硝基苯酚一光密度标准曲线 ．3l 3．2．2肠球菌中13-D-葡萄糖苷酶活性分析条件的研究 ．32 3．2．3验证最优酶活测定条件 35 3．3小结 36 第4章肠球菌产13-D-葡萄糖苷酶条件优化 ．37 4．1材料与方法 ．．37 4．1．1实验材料 ．．37 4．1．2方法 一38 4．2结果与讨论 ．．39 4．2．1基础产酶培养基的筛选 39 4．2．2基础产酶培养基组分优化 40 4．2．3发酵条件优化实验 43 4．3小结 ．47 第5章13-D-葡萄糖苷酶分离纯化及酶学性质探究 49 5．1材料与方法 ．49 5．1．1实验材料 49 5．1．2方法 5 1 5．2结果与讨论 55 5．2．1 13-D一葡萄糖苷酶的分离纯化 一55 5．2．2 13一D一葡萄糖苷酶的基本性质 ．57 5．3小结 ．6l 第6章结论与展望 ．．63 6．1结论 ．63 2 6·2展望 6·2展望 ．．64 参考文献 ．65 致 谢 ．75 在学期间主要科研成果 77 一、发表学术论文 77 ^ 3 口录 唱F tf 4 山东轻T业学院硕l：学位论文摘 山东轻T业学院硕l：学位论文 摘 要 银含提取物(EGb761)含有24％银杏黄酮内酯(Ginkgo-flavone glycosidesl 及6％萜类化合物(Terpenoids)，它可望成为治疗阿尔兹海默病(Alzheimers disease，AD)的有效药，但是其临床前期试验，包括代谢等还没有能够按照药物 研发的现代标准来进行。银含提取物的代谢主要是通过肠道微生物菌群分泌的水 解酶来进行的，由此，本文选定肠球菌为模式菌株，通过系列研究不但能够初步 阐明机体代谢吸收银杏提取物中主要有效成分的酶学及分子生物学的机制，而且 为按照现代药物标准研发银杏系列产品做好方法上的准备并提供理论依据，因此 具有理论研究和实际应用双重重要意义。目前，国内外尚未见此方面成功的研究 报道。 首先通过响应面法优化设计得到了肠球菌最佳培养基配方为：葡萄糖 1．87896％