人教版选修全一册基因工程简介教学设计.docVIP

PAGE 基因工程简介（7月13日） PAGE PAGE 4 第三节：基因工程简介 一、基因工程的概念： 1、别名：基因拼接技术、DNA重组技术 2、操作环境：生物体外 3、操作水平：基因（分子）水平 4、基因过程：剪切→拼接→导入→检测 5、目的：定向改造生物体的遗传性状，获得人类所需要的基因产物。（可使生物发生定向的变异） 6、变异类型：基因重组 二、基因操作的工具： 1、基因的剪刀——限制性内切酶（限制酶） （1）存在：主要存在于微生物中 （2）作用：识别特定的核苷酸序列，并在特定的切点切割DNA （3）特点：具有特异性 （4）切割的具体部位：脱氧核糖与磷酸之间的磷酸二酯键 （5）种类：200多种 ……ATGCTACGGCATTCGAAGTC………… ……ATGCTACGGCATTCGAAGTC…… ……TACGATGCCGTAAGCTTCAG…… 2、基因的针线——DNA连接酶 功能：把两条DNA末端之间的缝隙缝合起来。（即：将被限制切断的磷酸二酯键连接起来） 注：限制酶和DNA连接酶的作用部位都是脱氧核糖与磷酸之间的磷酸二酯键。即相当于螺旋梯的“扶手”而不是碱基对之间的氢键。（碱基对之间的氢键属于分子间的作用力，它的形成不需要酶的催化） 3、基因的运输工具——运载体 （1）常见种类 质粒（最常用的运载体）、噬菌体、动植物的病毒等 （2）作为运载体应具备的条件 ①能在宿主细胞中复制并稳定的保存。 ②具有多个限制酶的切点，便于与外源基因连接。 ③具有某些标记基因，便于筛选。 特别提醒：（1）运载体应具有多个限制的酶的切点，但对于同一种限制酶来说，运载体上最好只有相应的一个切点。 （2）运载体上至少应有一个标记基因。 （3）最常用的运载体——质粒 ①本质：小型的环状DNA分子。 ②所含基因：抗药性基因、固氮基因、抗生素基因等。 ③特点：对宿主细胞的生存无决定性作用，能在宿主细胞中存在并复制。 三、基因操作的基本步骤：（四步曲） 1、提取目的基因： （1）目的基因：即外源基因（控制合成人们所需产物的基因）。 （2）提取方法： ①直接分离法——常用“鸟枪法” ②人工合成法——反转录法、据氨基酸序列化学合成法 特别提醒：（1）“鸟枪法”为什么一般不适用于获取真核生物细胞中的基因？原因是：真核细胞的基因编码区含有不能表达的内含子。这样会导致基因的长度加大，若用“鸟枪法”提取，很容易使基因的结构破坏，而得不能完整的目的基因。 （2）不管用哪种方法获取目的基因，都严格遵循碱基互补配对原则。 （3）PCR技术——DNA扩增技术，可在短时间内对目的基因进行大量的扩增（复制）。 （4）据氨基酸序列合成出的目的基因可能有多种，但这并不影响目的基因表达的产物。 （5）通过人工合成法提取的目的基因，因得到的仅仅是基因的外显子片段，要对此进行修饰（加上调控序列——非编码区）才能进行下一步的操作。 2、目的基因与运载体结合（重组） 质粒 质粒 DNA分子（含有目的基因） 用同一种限制酶切割 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 用DNA连接酶缝合 重组质粒（重组DNA分子） 特别提醒： （1）此过程仍要遵循碱基互补配对原则 （2）目的基因与运载体的结合可能出现三种情况： ① 目的基因与目的基因结合。 ② 质粒与目的基因结合。 ③ 质粒与质粒相结合。 因此，需对受体细胞是否导入重组质粒进行检测，检测方法：据质粒（运载体）上的标记基因的产物来判断是否成功导入重组质粒（运载体）。 【例1】基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是 —G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。根据图示判断下列操作正确的是（ ） Gene GeneⅠ GeneⅡ GATC CTAG GGATCC CCTAGG 目的基因 GGATCC CCTAGG GATC CTAG （注：GeneⅠ和GeneⅡ表示两种标记基因） 表示两 质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割 质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割 质粒和目的基因均用限制酶Ⅰ切割 质粒和目的基因均用限制酶Ⅱ切割 3、将目的基因导入受体细胞 CaCl CaCl2处理 重组质粒（重组DNA分子） 受体细胞（细菌为例） 细胞壁通透性增大 目的基因随受体细胞的繁殖而复制 特别提醒：（1）此过程不需遵循碱基互补配对原则。 （2）据基因操作的目的不同，可选用不同的受体细胞。 ①生产基因工程药品（如胰岛素），受体细胞一般采用细菌，利用细菌繁殖速度快的特点，可在短时间内获得大量基因工程的产品。②培育转基因动物，受体细胞一般选用受精卵。③培育转基因植物，受体细胞可选用受精卵或体细胞，若用体细胞，则一定要进行植物组织培养，即可获得转基因