菊花上番茄斑萎病毒的血清学检测及分子鉴定.PDFVIP

植物保护学报Journal of Plant Protection ，2019 ，46 （1）：253-254 DOI ：10.13802/ki.zwbhxb.2019.2017152 菊花上番茄斑萎病毒的血清学检测及分子鉴定 Serological detection and molecular identification of Tomato spotted wilt virus in chrysanthemum 1 1 1 2 2* 1 郭京泽 胡佳续 王仲敏 刘 梅 李兴红 王万骞 （1. 中华人民共和国天津海关，天津300461 ；2. 北京市农林科学院，植物保护环境保护研究所，北京 100097） Guo Jingze1 Hu Jiaxu1 Wang Zhongmin1 Liu Mei2 Li Xinghong2* Wang Wanqian1 （1. Tianjin Custom District P. R. China, Tianjin 300461, China; 2. Institute of Plant and Environment Protection, Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Beijing 100097, China） 菊花是一种重要的花卉和药用植物，受到病害 Multiskan FC 酶标仪，美国Thermo Scientific 公司； 侵染时，其会失去观赏价值。目前我国报道的侵染 Smart Cycler PCR 仪，美国Cephid 公司。 菊花的病毒种类主要有菊花B 病毒（Chrysanthe- 1.2 方法 mum virus B ，CVB ）、番茄不孕病毒（Tomato aspermy TSWV 特异引物：TSWV-Cpo-F （5-ATGTCTA- virus ，TAV ）、烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus ， AGGTTAAGCTCACTA-3 ）/TSWV-Cpo-R （5-AGA- TMV ）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus ， AGTTCTGCGAGTTTTGC-3 ）（孙淼等，2017 ）；L 1- CMV ）等。近年来，在北京市菊花产区发现，部分菊 TSWV （5-AATTGCCTTGCAACCAATTC-3 ）/L2-T- 花植株有被番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt vi- SWV（5-ATCAGTCGAAATGGTCGGCA-3 ）（Stanko- rus ，TSWV ）侵染的疑似症状。为确定该产区菊花 vićetal.，2013），由上海英骏生物技术有限公司合成。 是否受到TSWV 危害，利用TSWV 的特异抗体和引 DAS-ELISA ：利用TSWV 特异性抗体对13份菊 物，采用双夹心酶联免疫吸附测定（double antibody 花样品进行DAS-ELISA 检测；将菊花样品研磨并加 sandwich assay ，DAS-ELISA ）方法和反转录PCR （re- 入抽提缓冲液，样品重量与抽提缓冲液体积比为1∶ verse transcription-PCR ，RT-PCR ）技术对采自北京市 10。在酶联板上设定待检样品孔和对照孔，感染 顺义区的13份菊花样品进行检测，建立了适宜的反 TSWV 植物材料作为阳性对照，健康植物材料作为 应体系和扩增程序，以期为TSWV 的防控提供技术 阴性对照，抽提缓冲液作为空白对照。操作步骤参 支撑。 照试剂盒说明书，当样品吸光值OD405 nm2 倍阴性 1 材料与方法 OD405 nm 时，样品被判定为阳性，否则为阴性。 1