trpc6在肾癌中的表达及其介导肾癌细胞增殖与迁移的研究临床医学临床检验诊断学专业论文.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的 肾细胞癌(renal cell carcmm如RCC)是泌尿生殖系统中最常见的恶性肿瘤之 一，由于缺乏早期诊断标志，导致肾癌患者高比例的肿瘤转移，其中位生存期 大约为13个月，因此在RCC的诊断和治疗上有待于寻找新的作用靶点。 肝细胞生长因子(1lepatocyte growth factor，HGF)，与受体c-Met结合，能够 促进肿瘤细胞的迁移、侵袭能力及新生血管的生成，在肿瘤细胞转移或直接浸 润周围组织过程中发挥重要作用。有研究证实，在肾癌中过表达HGF及其受体 c-Met，提示与RCC的转移、侵袭相关，对肾脏恶性肿瘤的诊断和预后，可能 具有潜在的临床价值。 瞬时受体电位(transientreceptorpotential，TRP)通道家族是一种非选择性钙 离子通道蛋白，在维持细胞稳态方面具有重要的作用，并且可以调节多种细胞 生物功能，其表达升高有助于促进恶性肿瘤的生长，其中亚家族TRPC通道包 括TRPC(1-7)，已有研究证实TRPC6其在多种类型的肿瘤中均有表达并起着重 要的调控作用，但目前尚未见与肾癌相关的报道。 已有研究证实TRPC6是HGF诱导钙内流的调停者，TRPC6能够介导HGF 诱导肾小管细胞增殖，HGF和表皮生长因子诱导TRPC6过表达可促进肝癌细胞 的增殖，促进肿瘤的发生发展。本课题通过检测TRPC6在肾癌细胞系及肾癌组 织中的表达，研究TRPC6与肾癌分级的关系，并进一步调查验证TRPC6在肾 癌细胞增殖、迁移以及调控细胞周期过程中所起的作用，初步探讨TRPC在HGF 介导的肾癌细胞增殖、迁移中的影响。为研究和开发高选择性和高特异TRP通 道药物，及新的肾癌辅助疗法提供证据。 方法 1．RT-PCR技术及Western-blot技术检测肾癌细胞系1932、ACHN细胞中 TRPC6 mRNA及蛋白水平的表达，免疫组化方法检测60例肾癌组织及10 例肾癌旁组织中TRPC6蛋白水平的表达。 2．利用siRNA技术基因敲除ACHN细胞中TRPC6基因，降低TRPC6在ACHN 细胞中的表达，并用Western-blot验证干扰效率。 3．采用MTT和细胞划痕实验检测不同处理组ACHN细胞的增殖与迁移能力， 并研究TRPC6通道蛋白在HGF诱导的ACHN细胞增殖、迁移中的作用。 天津医科大学硕士学位论文4．流式细胞术检测TRPC6通道蛋白在ACHN细胞周期中的作用。 天津医科大学硕士学位论文 4．流式细胞术检测TRPC6通道蛋白在ACHN细胞周期中的作用。 结果 1．TI冲C6在肾癌细胞株1932及ACHN细胞中基因及蛋白水平均有表达。 2．免疫组化结果显示TRPC6在肾癌组织中定位于胞膜与胞浆，其在肾癌组织 中的表达水平明显高于癌旁组织中的表达，并且TRPC6在肾癌组织中的表 达随着组织Fuhrman分级的升高而增高，差异具有统计学意义。 3．siI矾A技术能够明显抑制TRPC6在ACHN细胞中的表达，MTT结果显示， 与对照组(ACHN)和干扰对照组(ACHN+siRNAc)比较，干扰组(ACHN+siRNA) 细胞增殖明显受抑制⑦O．05)，对照组和干扰对照组没有显著性差异，并且研 究提示HGF能够促进ACHN细胞的增殖(pO．05)，TRPC6干扰后可以抑制 由HGF诱导的细胞增殖作用(p0．05)。 4．划痕实验结果发现ACHN组与siRNAc组的迁移指数相似(pO．05)，HGF作 用后ACHN细胞迁移能力明显增强，但siRNA+HGF组的迁移指数明显低于 ACHN+HGF组(矽0．05)。 5．细胞周期实验发现siRNA组处于G2／M期的细胞数目与对照组和干扰对照组 相比明显增多(p0．05)，下调TRPC6的表达能够使细胞阻滞在G2／M期。各 组中亚Go期无明显改变，因此TRPC6阻断后细胞数量的减少不是由凋亡引 起的。 结论 1．TRPC6在1932和ACHN细胞系中均表达，TRPC6在肾癌旁组织中弱表达， 在肾癌组织中的表达明显高于肾癌旁组织，并且表达水平与肾癌的组织分级 有关。 2．RNA干扰技术可以有效的抑制TRPC6在ACHN细胞中的表达，阻断TRPC6 通道可以抑制ACHN细胞的增殖与迁移作用并在HGF诱导的细胞增殖与迁 移中起重要作用。 3．下调TRPC6的表达使细胞周期阻滞在G2期。 4．TRPC6在肾癌的发生发展过程中起着重要的作用，并介导了HGF诱导的肾 癌细胞的增殖与迁移作用。TRPC6通道蛋白有望成为治疗肾癌的一个新分子 靶点，本研究为治疗肾癌的抗癌药物和临床新方法提供重要线索。 关镭}词：肾细胞癌肝细胞生长因子TRPC6 siRNA细胞增殖细胞迁移 II 天津医科大学硕士学位论文 天