肝癌细胞乏氧环境下scf的表达调控机制研究临床医学;肿瘤学专业论文.docxVIP

大沣医科人学硕十学位论文中文摘要 大沣医科人学硕十学位论文 中文摘要 目的 肝细胞癌是常见的消化道恶性肿瘤。尽管包括手术和放疗化疗在内的治疗手 段取得了明显进展，但肝细胞癌的预后并未获得显著改善。乏氧是实体肿瘤普 遍的生长微环境，乏氧状态下肿瘤更易出现进展是临床治疗中所面临的难题， 然而肿瘤细胞适应乏氧环境的机制尚不明确。对肿瘤细胞适应乏氧环境相关基 因调控机制及功能的研究，有助于发现新的治疗靶点。 先前的研究表明，乏氧微环境可以诱导SCF的表达，SCF是促进肿瘤增殖 和血管新生的重要因子。本研究的前期工作发现：肝癌细胞在乏氧状态下出现 SCF转录活性的增加，HIF和SCF的同步表达上调，同时在SCF启动子区存在 低氧反应元件HRE。结合文献报道，我们推测SCF可能参与乏氧状态下肝癌细 胞病理生理过程的调控。 因此，本研究拟检测乏氧状态下HIF．I／HIF．2与SCF的调控关系；采用 ChIP、双荧光素酶活性分析等，阐明HIF．I／HIF一2与SCF的相互作用形式以 及HIF一1／HIF一2参与SCF基因转录调控机制：进一步结合临床资料、组织标本 对HIF币IJSCF之间的关系加以证实；最后观察SCF对肝癌细胞生长和血管新生过 程的自分泌作用和旁分泌作用进行研究，通过揭示乏氧状态下SCF的调控机制及 其功能，为临床治疗提供新的靶点。 方法 一、 明确乏氧状态下肝癌细胞中SCF表达水平和乏氧诱导因子HIF．1／HIF．2 与SCF的调控的上下游关系。 1．本研究选择肝癌细胞系HepG2、SMMC．7721、Bel 7402为研究对象。常 规传代培养。乏氧处理采用1％02、5％C02、94％N2混合气体对密闭培 养箱中的细胞进行培养。 2．应用细胞转染和RNA干扰技术下调HIF．1a／HIF．2a的表达； 3．分别应用RT-PCR和Western blot检测不同处理条件肝癌细胞中SCF、 HIF．1 c【、HIF．2a、VEGF及内参B．actin基冈和蛋白的表达情况； 4．ELISA检测不同处理条件下细胞培养上清液中分泌型SCF表达情况； 二、 研究乏氧状态HIF．1／HIF．2与SCF的相互作用以及转录调控机制 1．采用染色体免疫共沉淀技术(ChIP)明确HIF．1或HIF一2对SCF的调控 天沣医科人学硕十学位论文形式； 天沣医科人学硕十学位论文 形式； 2．应用HIF．1／HIF．2的过表达载体、SCF基因启动子或突变的SCF基因启 动子荧光素酶表达载体，共同转染肝癌细胞，采用双荧光素酶分析法， 定量检测HIF参与SCF基因转录激活的能力； 三、 分析SCF在肝癌细胞中表达的病理生理意义 1． 首先收集临床资料完整的肝癌组织标本，采用免疫组化分析肝癌组织中 SCF、HIF、新生血管标志物CD34的表达情况，进一步通过对临床资料 的分析，探讨SCF表达水平对肝癌预后的影响； 2．探讨SCF对肝癌细胞生长和血管新生过程的自分泌和旁分泌作用； 结果 乏氧信号可以诱导SCF mRNA和蛋白的表达，通过RNA干扰技术沉默乏 氧诱导因子．2(HIF．2)的表达，可以|可时抑制SCF的表达，而沉默HIF．1则没 有此抑制效果；深入研究发现，HIF．2可以结合于SCF基因启动子区的乏氧反应 原件(HRE)，并且可以直接上调SCF的表达；进一步通过临床组织病理学检测 分析，HIF．2和SCF的表达和肝癌的组织病理学分级、TNM分期、静脉侵袭和 伴发肝硬化密切相关；HIF．2和SCF在肝癌组织中高表达，并且表达水平呈正相 关；SCF通过自分泌作用可以促进肝癌细胞的增殖，同时通过旁分泌作用促进 血管内皮细胞的迁移和管状形成。 结论 SCF是促进肝癌增殖和血管新生的重要细胞因子；乏氧环境下HIF一2是调节 SCF表达的关键转录因子；通过干预HIF一2和SCF信号通路，有可能成为治疗 肝癌的潜在靶点。 关键词： 肝细胞癌乏氧乏氧诱导因子SCF乏氧反应元件 天津医科人学硕十学位论文Abstracts 天津医科人学硕十学位论文 Abstracts objective Hepatocellular carcinoma is common in gastrointestinal cancer．Despite improvement of therapeutic methods including Surgery,radiotherapy and chemotherapy,the malignant tumor remains a poor prognosis．Hypoxia is a common microenvironment of Hepatocellular carcinoma．Hypoxia plays a central