地黄试管块根诱导及茎尖玻璃化法超低温保存作物遗传育种专业论文.docxVIP

IAA的含量则呈现下降趋势；GA3的含量在培养卜14d呈增高趋势，14d后则急剧下 IAA的含量则呈现下降趋势；GA3的含量在培养卜14d呈增高趋势，14d后则急剧下 降； JA的含量整体变化幅度不明显。在MS+6-BA 1．0mg／L+NAA0．5mg／L培养基 中可诱导形成试管地黄，此间IAA含量的变化与诱导植株再生的情况相反，呈快速 上升趋势；GA3的含量先明显下降，而14d后上升至刚离体的水平； JA的含量在 培养初期l一7d期间急速下降，当不定根形成时，又恢复到原先水平，14d后在不定 根膨大形成试管地黄的过程中其含最迅速增长，21d时JA含量是叶片刚离体时的近 5倍。两种培养基中叶片在l一14d培养期间，ABA的含量均下降，14d后再上升， 但是叶片在诱导植株直接再生的过程中，ABA上升和下降的幅度明显大于叶片诱导 形成试管块根时。试验结果说明，内源IAA和GA3对植株的再生起关键作用，而JA 和ABA参与了不定根的诱导及其进一步膨大形成试管块根，并且有可能起着极为重 要的作用。 4．试管地黄在形态解剖方面与自然条件下生长的地黄具有一致性，两者的成熟 结构基本上相同。在横切面上，二者都分为周皮和维管组织两部分，周皮的构成(木 栓层、栓内层、木栓形成层)基本一致，维管柱中各种组织细胞在结构或数量上均 相似。因此．试管地黄在诱导过程中其结构上未发生明显变化。。 5．建立了地黄茎尖超低温保存的技术体系。切取10ram长的地黄脱毒苗茎尖接种 于含0．2-0．6mol／L蔗糖的MS培养基上，并添加1％-5％乙酰胺、5％DMSO；在黑暗、 10℃条件下预培养1--5d后，切取0．5—3．5mm长的茎尖，用60％PVS2在25℃下装 载25min，然后用100％PvS2于O℃脱水处理10--50min，换入新鲜的PVS：，迅速投 入液氮(LN)中，24h后取出于40℃水浴中化冻，立即用1．2mol／L蔗糖的液体培养 基洗涤2次，每次10min，然后用氧化三苯基四氮唑(TTC)法检测成活率，或接静 于MS+6一BA 0．3mg／L+NAA o．02rag／L+3％蔗糖的固体培养基上，于25℃暗培养一周 转至光下培养。结果表明，地黄茎尖超低温冻存后用TTC法检测茎尖最高成活率达 75％以上，植株再生率达50％，再生后的苗与对照没有形态上的变异。 关键词；地黄。试管块根，内源激素，形态建成，玻璃化，超低温 9 ABSTRACTRehmannia ABSTRACT Rehmannia glutinosa Libosch is perennial herbaceous medicine Dlant of scrophulariaeeae family and known as one of four famous Huai Chinese traditionaI medicine．Its flesh tuberous root named flesh足glutinosa and finished products named crude R．glutinosa or prepared R glutmosa were used as medicine R glutmosa is easy to suffered by many diseases especially viruses that usually infect plants by 100％and lead to serious variety degeneration and decrease economic benefit of the farmers．Shoot-tip culture m vitro is the most efficient approach to produce virus—flee plants HoweveC low propagation rate，long procedure，low survival ratio and difficulties in plantlets handling prevent this strategy from its popularization．In recent years，the microtubers of Pinellia ternate and potato，corm of dasheen have been induced in vitro aiming at to substitute virus—free plantlets．Especially virus—free potato micro tubers has proved a possible alternative in seed