茶树中咖啡碱合成酶基因的抑制及在其它生物体中的表达茶学专业论文.docxVIP

蜜徽农鼗天学耩}：举纯论文；荣薅孛稼蜷馘奄琏鹜摹稍麴撩制投盎其德妻掳体垮懿表达(余胄率籀艇)摘 蜜徽农鼗天学耩}：举纯论文；荣薅孛稼蜷馘奄琏鹜摹稍麴撩制投盎其德妻掳体垮懿表达(余胄率籀艇) 摘 要 蝴啡碱(1，3，7一三翠基黄漂岭)怒茶斗巾嘌岭碱的主体成份，约蠢于物质量羽 2溅。它愚键赛上黢礤袋广泛鹃翡栽乏一，邋壤摄入朔蹲碱霹黻兴奋耱缀中疆，有剩 予提糍反艘速度，嶷中注意力蚕羹瀵踩壤劳。然蠢，摄入过繁瓣秘避}碱会瓣太臻产生短 期的负霹住瑁，如会引超心悸、褥肠痛、焦虑、烦躁、失眠、孵吸频率增加、斑压升 嵩、。§搴必零，并霹毅诱每心瓤寝塞穰嚣心瘸瓣静发生；瑟强，摄入{璧爨灏稚疆还搿 增魏毖慕整癌症I魏器邀毽、黪麟瘗、墨￡黥熬等)毂辘率。轰楚出于以上这整苓剥黪 负蕊住厢，所以在潮内我国际市场上，都希臻商脱低)瑚啡碱静茶时和茶饮料的产 品。本醛究苏悫势《34凳糖籽，魄较系统建臻宠了茶提夔嚣生髂象，壳凝劳程大肠释 菌中秘溜鼙中表达了茶辫咖硭碱食戏酶(tea e娃fe{舱synth8se，les)蒸瓣。舅终， 还剩用反义RNA技米和敝链硝A(double．s枉徽ded RNA，dsR撇)投术掷铡懒皤溅合成 酶鏊溺熬裘达。 戮秘裘除咖啡溅滟方法主要逶透过鬻娥帮静的方法逸肖低啦口{}碱茶树品释，或拦 茶蹄鸯霸王遐程中运蠲怒稻界萃敬溶。键是，遴道常缀育穆鞠方法选育{氐璐瞬躐茶褥晶 穆，溪少鬻簧20肇象舂，嚣虽邈蠢滋熬茶嚣瑟转不～定§￡滤裁多耱多撵熬荼时窝荣 饮料；灏工过程中掰超峪界萃取法去除咖啡碱会严整影响到祭时龉质，尤蒸怒茶时香 气帮潦昧。骧上这黧方法都不麓麸穰零上簿决驻麴礤碱闾戆，嚣藏，势了满懋市溺上 对驻濑礴碱茶时豹爨礅，应爱基鞭二[稔敬方法绥裔低壤蹲戳藩捉可裁是一确宓胃行豹 途径。艇义RNA控术怒一种狠褥效的傻基因流默的方法，强簿已广泛驻用于植物的 遗传育静皆。零实验遴遥鞠二Pc袋扩蹭了8驰b蛰靛羊￡s鏊鞭e转NA片段，滚片段魁 括5’满誓编鸡区秘囊嚣分编码区j葶剐；然磊将谈片段反岛撬入垂g双元载体鹋lj2l豹 35S盛秘予下游，榭建成表达110S发义RNA靛中间表达载体：箨通过农杼麓时盘转 纯法转位凌蘩褥子咛诱学产生韵褰绕缀织，终祭获缮了获憋愈臻缝织；pCR麓辨PC鼗 验证结果旋明，Tc8魇义基嫒融整合到抗褴愈馋缱织的藜圆缀中，势能交迭反义 RNA。程茶秘遗传商种领域，应爝反义RNA技术溺属首次，本实验获褥静撬经愈伤 缝缓磐麓藏为诋秘礤溅瓣萘穗夺撬拣。 DsRNA技术怒近几年习’剐剐发袋起来豹耨技术，将上述脒A片段豫肉鞠友淘 播天到双元载俸p转l{2l鹣35s聩鼢予下游，褥片敬之闯国魏碡00 bp熬GUS鐾函片 段瞩拜，鼯戏反肉黧簧葶受，出诧稳遴藏了表达罩cS萋霆旗}瀑A懿中鲻豪这载镕。 蜜徽农业太举博．I：学位论义：荣树中咖啡碱合成簿难闲的抑制擞和越他生物体中的裢选(余有奉2004)透过了农转蕊时鑫转纯法转谴交茶辩予咛透罢产生爨愈蘩缝织，结采也获褥了抗缝惠 蜜徽农业太举博．I：学位论义：荣树中咖啡碱合成簿难闲的抑制擞和越他生物体中的裢选(余有奉2004) 透过了农转蕊时鑫转纯法转谴交茶辩予咛透罢产生爨愈蘩缝织，结采也获褥了抗缝惠 伤组织。融予茶树抗性愈伤组织生长非常缓慢，还米进行鉴定工作。 本研究猩前人的基础上，对各种因索对愈伤组织诱导和体细胞Jjii；的发生以欲其分 亿搴熬影鞠{乍了迎鞍系统懿磅究。爱畸片、茎段鞠肄横均霹诱导产生愈巍蕴织，鼠诱 导愈傍组织酌效采来看，2，4一D话于№盏，丽置离浓壤舔2，4一B容易诱导惑穗组织产 生不定根。擞验结果表明，来源于营养器官的外植体往往只能分化出根，较难分化出 芽，来源予粒子熬子对乡}校薅较易诱鼯俸缨您憝或不定芽。透过零谤究，穗定了“子 时矫植体一体缎庭籁(分豫芽)一再生攘株”的荼秘褥生薅系，瘫驻了嘉《豹蘩糍鏊霹 工程研究的瓶颈，为将来茶树的遗传转化奠定了基础。 瑚璋}碱食戏酶是茶树中期毽}碱生物会戏途径中的关键酶，催化簸菪薅步甲基纯复 痣。逶过髂KR法扩增蹬Ks荃觳cDNA编码嚣全露磺，势将其克隆垂表达戴体 pET．32a(十)中，在表达宿擞菌BL2lfMB(DE3)中高散袋达产生分予凝约为62 kDa的融 合蛋自，该融窘蛋白包攒112个氨基酸残基豹硫氧还原蛋白及370个氨基酸残基豹 K!s蛋鑫。疆篱诱导舞澍懿延长，表达的避金蛋自产爱逐渗瑶颠，装运蛋鑫惑璧最高 可达到菌体总蛋白的39．14％；在15 oC、25。c和37。c三个不同的诱导温度下，均 能诱导产生融合蛋白，莉尽产生的融会蛋自的总量敷其可溶性部分艇占比例均髓诱导 滠度舞毫恧躐麓；在莹髂翡蚤个蘩整中，融台蛋塞主要在缝藤矮孛疆霹溶靛形式避行 袭达，有少裁在外周质中鞭达或以包台体形式在细胞质中表达。鹦外，体外酶怩反应 表明表达韵