生物实验室传统杀菌方式与奥克泰士科学杀菌的深入论证.docVIP

生物实验室传统杀菌方式与奥克泰士科学杀菌的深入论证 简介 在工业微生物培养过程中，只允许生产菌的存在和生长繁殖，不允许其他微生 物的存在；在所有发酵过程屮，必须进行纯种培养。 规范微生物实验室清洁 与消毒程序，使洁净区环境控制始终符合GMP要求，减少甚至避免因环境不合 格导致的假阳性结果的出现。因此，建立实验室无菌环境，树立无菌观念，强 调无菌操作是至关重要的。实验医学微生物学常用的器材一般包括玻璃器材、 金属器械、橡胶制品及塑料制品等，毎类器材的处理及消毒措施都有不同。严 格的消毒灭菌工作极为重要，直接影响着整个实验能否顺利进行。 芽砲也叫芽胞，有部分领域称之为“砲子”，但学术上芽胞和砲子是两种不同 物质。芽胞是细菌的休眠体。某些细菌（芽孑包杆菌，梭状芽孑包杆菌，少数球菌 等）在其生长发育后期，在细胞内形成的一个圆形或椭圆形，厚壁，含水量低, 抗逆性强的休眠体构造，称为芽抱。芽胞是整个生物界屮抗逆性最强的生命体, 在抗热，抗化学药物和抗辐射等方而，十分突出。例如，肉毒梭菌的芽胞在沸 水中要经过5至9. 5小时才被杀死；巨大芽胞杆菌芽胞的抗辐射能力比E. coli 细胞要强36倍。芽胞的休眠能力更为突出，在常规条件下，一般可以保持儿年 至几十年而不死。据文献记载，有的芽胞甚至可以休眠数百至数千年，最极端 的例子是在美国的一块有2500万~4000万年历史的琥珀，至今从其中蜜蜂肠道 内还可以分离到有生命的芽胞。 芽胞特点： 自由存在的芽抱没有明显的代谢作用，只保持潜在的萌发力，称为隐藏的 生命。一旦环境条件合适，芽砲便可以萌发成营养细胞。 芽抱是细菌的休眠体，在适宜的条件下可以重新转变成为营养态细胞。 产芽他细菌的保藏多用其芽他。产芽他的细菌多为杆菌，也有一些球菌。 芽孑包的有无、形态、大小和着牛位置是细菌分类和鉴定中的重要指标。 芽砲与营养细胞相比化学组成存在较大差异，容易在光学显微镜下观察。 （相差显微镜直接观察；芽孑包染色） 芽胞是人人都讨厌和害怕的一种生物，因此灭菌也一直以来都是大家都在热议 的话题。杀灭芽胞对制药厂洁净车间、GMP车间、实验室、化妆甜生产车间、 保健品生产车间等场所来说十分重要，是否能消灭芽砲也是衡量各种消毒灭菌 手段的最重要的指标。那么说到灭菌，我国目前GMP条例对实验室（特别是无 菌品）都存在着极其严格的要求。在GMP的验证过程中，很多的人力推过氧化氢 灭菌这一方法。其实，国内目前比较常用的几种灭菌方法包括干热灭菌法、湿 热灭菌法和臭氧灭菌法等等。不过过氧化氢是上述几种灭菌最好的消毒剂。 消毒灭菌方法 目前，常用的消毒灭菌方法多采用物理方法（如，干热灭菌法、湿热灭菌法、过 滤除菌法、射线杀菌法等）和化学方法（消毒剂、抗生素）两大类。 物理方法： 干热灭菌法 是利用恒温干燥箱内120°C?150°C的高热，并保持90?120分钟，杀死细菌和 芽孑包，达到灭菌目的的一种方法。用此方法灭菌的物品干燥，易于贮存。酒精 灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法Z-,在进行动物细胞体外培养工 作时，常须利用工作台而上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充 灭菌。但适用性小，容易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及蒸汽接触的物 品。 湿热灭菌法 压力蒸汽湿热灭菌法是目前最常用的一种灭菌方法。它利用高压蒸汽以及在蒸 汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物 死亡。适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸憾水、棉塞、纸和 某些培养液的灭菌。高压蒸汽灭菌器的蒸汽压力一般调整为1.0?1.1 kg/cni2, 维持20?30min即可达到灭菌效果。缺点：如果是对培养基或是液体溶液灭菌, 灭菌时间与需要的培养基或液体溶液的体积密切相关。时间不足达不到灭菌效 果，时间过长培养基里面的化学物质遭到破坏。影响培养基成本。 射线灭菌法 利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀 灭多种微牛物。紫外线的作用机制是通过对微牛物的核酸及蛋白质等的破坏作 用而使其灭活。适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌。灭菌吋间为30mino 用紫外线杀菌时应注意，不能边照射边进行实验操作，因为紫外线不仅对人体 皮肤有伤害，而且对培养物及一些试剂等也会产生不良影响。 过滤除菌法 是将液体或气体通过有微孔的滤膜过滤，使大丁滤膜孔径的细菌等微生物颗粒 阻留，从而达到除菌的方法。过滤除菌法大多用于遇热易发生分解、变性而失 效的试剂、酶液、血清、培养液等。在过滤除菌中，一般无法对全过程中过滤 器的关键参数（滤膜孔径的大小及分布，滤膜的完整性及LRV）进行监控。因此, 在每一次过滤除菌前后均应作滤器的完整性试验，即气泡点试验或压力维持试 验或气体扩散流量试验，确认滤膜在除菌过滤过程屮的有效性和完整性。