弱化呼吸链水平对代谢工程大肠杆菌聚羟基丁酸乳酸酯合成的.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 陆静娴 等/弱化呼吸链水平对代谢工程大肠杆菌聚羟基丁酸乳酸酯合成的影响 59 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn Jan. 25, 2019, 35(1): 59−69 DOI: 10.13345/j.cjb.180107 ©2019 Chin J Biotech, All rights reserved ·工业生物技术· 陆静娴，李志敏，叶勤，吴辉 华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室，上海 200237 陆静娴, 李志敏, 叶勤, 等. 弱化呼吸链水平对代谢工程大肠杆菌聚羟基丁酸乳酸酯合成的影响. 生物工程学报, 2019, 35(1): 59–69. Lu JX, Li ZM, Ye Q, et al. Effect of reducing the activity of respiratory chain on biosynthesis of poly(3-hydroxybutyrate- co-lactate) in Escherichia coli . Chin J Biotech, 2019, 35(1): 59–69. 摘 要 : 聚 3- 羟基丁酸乳酸酯[Poly(3-hydroxybutyrate-co-lactate) ，P(3HB-co-LA)] ，属于聚羟基脂肪酸酯 (Polyhydroxyalkanoates ，PHA) 家族的一员，是一种具有良好生物相容性和可降解性的天然高分子生物材料。文中通 过在大肠杆菌中引入来源于富养罗尔斯通氏菌Ralstonia eutropha 的β-酮硫解酶、乙酰乙酰CoA 还原酶、来源于丙酸 梭菌Clostridium propionicum 的丙酰CoA 转移酶突变体以及荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens strain 2P24 来源的 PHA 合成酶突变体等异源酶，成功实现了一步法利用葡萄糖合成 P(3HB-co-LA) ，其中乳酸组分的摩尔百分比达到 1.6%，聚合物含量为83.9 wt%。在此基础上，通过敲除辅酶Q8 合成所需的黄素异戊烯基转移酶基因 (ubiX) 来弱化呼 吸链水平，从而增强乳酸积累，并进一步缺失乳酸脱氢酶基因 (dld) 以减少乳酸在发酵后期转化成丙酮酸，最终将 P(3HB-co-LA) 中乳酸组分的摩尔百分比提高至14.1%，而聚合物含量为81.7 wt%。上述实验结果表明，采用弱化呼吸 链水平策略可有效提高聚合物中乳酸组分的摩尔百分比，从而提供了一种改变生物合成聚合物中单体组分含量的新思路。 : 聚3-羟基丁酸乳酸酯，大肠杆菌，代谢工程，乳酸组分，呼吸链弱化，Q8 ，聚羟基脂肪酸酯(PHA) Effect of reducing the activity of respiratory chain on biosynthesis of poly(3-hydroxybutyrate-co-lactate) in Escherichia coli Jingxian Lu, Zhimin Li, Qin Ye, and Hui Wu State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China Abstract: Poly(3-hydroxybutyrate