大珠母贝和企鹅珍珠贝组织蛋白酶d基因及α淀粉酶基因的克隆与表达分析水产养殖专业论文.docxVIP

lIll lIll l l Il l II 110 ＼1 947 Molecular cloning and expression analysis of cathepisn ● D and alpha amylase gene in pearl oysters Pinctada ■ maxl，咒口and Fterta Penguln A Dissertation Submitted By Liling Pan ● For The Degree of Master ofAgronomy Supervisor：Professor Dahui Yu Speciality：Aquaculture Shanghai Ocean University ● Shanghai 201306，P．R China South China Sea Fisheries Research Institute，CAFS Guangzhou 5 10300，P．R．China June，2011 上海海洋大学学位论文原创性声明 上海海洋大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导 下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含 ● 任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所 写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：口番例伶 Et期：伽，／年6月J砂日 上海海洋大学学位论文版权使用授权书 学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海水产大学可以 ◆ 将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复 制手段保存和汇编本学位论文。 保密 口 ，在 年解密后适用本版权书。 本学位论文属于 不保密彳 学位论文作者签名：海例拎 指导教师签名： Et期：20f『年6月f胡 日期： 年 月 ● 文姓名 文 姓名 工作单位 职称 备注 杀潋 』b咯多≮穴孳 础 p坦 (渤江乡确吃泐 砑免迓 鲡缓充 碑。少水批移≯、| ．J ’砀锨 J I 励·无 瑚l蜃奶多确％计 确红次 ● 锄∞旱 两嘞奶编拟 廊蹇曼 答辩地点 7，W陶彻潞讶务聊 答辩日期 b f1．匆．J o ● 大珠母贝和企鹅珍珠贝组织蛋白酶D基因及a．淀粉酶基因的 大珠母贝和企鹅珍珠贝组织蛋白酶D基因及a．淀粉酶基因的 克隆与表达分析 ● 摘要 大珠母贝．(Pinctada maxima)分布于中国、澳大利亚和东南亚沿岸热带和亚热带 海域，是世界上最优质的育珠贝，具有极高的经济价值。企鹅珍珠贝(Pteria penguin)主要分布于我国两广、海南、台湾沿海以及同本九州的南部，琉球群岛 直至菲律宾等地，主要用于培育附壳珠和大型游离珍珠。 本研究通过同源克隆方法获得了大珠母贝和企鹅珍珠贝的组织蛋白酶D基因 和a．淀粉酶基因，并对其序列特征和组织表达进行了分析；为进一步研究组织蛋 白酶D在免疫方面的功能和作用机理奠定基础，为探讨大珠母贝养殖死亡原因积 累资料：为筛选a．淀粉酶基因的SNP多态位点、丌展SNP多念位点和生长性状的 ● 关联分析奠定基础。 主要结果如下： 1、通过同源克隆方法和cDNA末端快速扩增技术(RACE)，获得了大珠母贝 (Pinctada maxima)组织蛋白酶D基因(命名为pmCTSD)的cDNA全长序列1 742 bp，其中5’非翻译区(UTR)38 bp，3’UTR 534 bp，开放阅读框1 170 bp，编码390 个氨基酸，分子量约为41．9 ku，等电点约为7．57。序列特征分析表明，pmCTSD蛋 白由信号肽(Metl．Alals)、前体域(LeUl9．Lys47)和成熟域(n“8．Asn390)3部分组成。 同源性分析表明，pmCTSD氨基酸序列与其他物种高度保守，一致性介于64％-70％ 之间。进化分析表明，pmCTSD与栉孔扇贝亲缘关系最近，与传统分类结果基本一 致。组织表达荧光定量分析发现，pmCTSD在闭壳肌、性腺、肝胰脏、外套膜和鳃 组织中都有表达，但在性腺中表达量最高，肝胰脏次之。经哈维氏弧菌(Vibrio ● harveyi)浸泡刺激6 h后，朋C礤D基因的mRNA表达水平在肝胰脏中表达量最高并 略有上升但差异不显著(PO．05)，在其他组织中表达量均很低，其中性腺显著下 调(P0．01)。上述结果为进一步开展pmCTSD的功能研究奠定了重要基础。 2、企鹅珍珠贝组织蛋白酶D基因(命名为pgCTSD)cDNA全长1,767 bp，其 中5’UTR