蒽贝素对脂多糖诱导小鼠心脏炎症损伤的影响基础医学专业论文.docxVIP

浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 蒽贝素对脂多糖诱导小鼠心脏炎症损伤的 影响 浙江大学医学院 免疫学 硕士研究生 钱香 导 师 夏大静教授 中文摘要 背景 在过去的20年中，脓毒症一直呈逐年上升趋势，病死率高达50％以上。其导致 各脏器衰竭的病理生理机制尚未明确，降低其病死率一直成为危重病学难以攻破 的重大难题。脓毒症患者通常伴有心功能障碍。葸贝素(Embelin)是白花酸藤果 的主要成分，近来越来越多的研究表明葸贝素还具有抗氧化、护肝、抗糖尿病、 抗菌、抗癌等作用，并可在多种器官中发挥抗炎作用。 目的： 本研究旨在利用LPS诱导的脓毒症小鼠模型，观察葸贝素对脓毒症心肌损伤是 否具有保护作用，探讨过氧化物酶增殖物激活受体v(peroxisome proliferator—activated receptory，PPARy)是否参与了葸贝素的心肌保护作用，并阐 明NF．rd3、TNF．O【在其中的作用。 方法： 1、实验分组 雄性C57BL／6J(B6)小鼠随机分为5组(n=17)。空白对照组(Contr01)：小 II 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 鼠腹腔注射等量的生理盐水。脓毒症模型组(LPS)：小鼠腹腔注射LPS(10 mg／kg)。 葸贝素治疗组(embelin)：小鼠腹腔注射LPS(10 mg／kg)，30分钟后注射不同浓度 葸贝素(5，10，and 20 mg／kg，i．p．)。 2、心肌肌钙蛋白I的检测：小鼠眼眶取血后，分离血清。双位点酶免法(夹心法) 测定血清中心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I，cTnI)含量。 3、免疫组化法检测心肌组织PPAR-nI和TNF．a蛋白含量：左心室组织，置于10％ 中性福尔马林中固定后，常规包埋、切片、脱水、封闭后，PPAR吖或TNF．伐一抗 (兔IgG，稀释倍数1：100)4。C过夜，二抗室温37。C孵育30分钟，DAB显色。 4、Western blot检测细胞核内NF—KB蛋白含量：取心脏左心室心尖部分，匀浆提 核蛋白，用Western Blot来检测NF．v．B蛋白表达情况。 结果 1、心肌损伤指标心肌肌钙蛋白I的检测 与空白对照组相比，脓毒症模型组小鼠血清cTnI水平明显增高(5．15+0．25 ng／ml，VS空白对照组0．11+0．02 ng／m1)。与脓毒症模型组小鼠相比，低浓度葸贝 素治疗组小鼠血清cTnI水平无明显差异。而中、高浓度葸贝素治疗组小鼠血清 cTnI水平明显低于脓毒症模型小鼠，且呈现浓度依赖性(分别为3．96+0．33 ng／ml 和2．5 1+0．19ng／m1)。 2、HE染色观察心肌细胞结构 空白对照组小鼠心肌HE染色显示心肌纤维形态结构正常，心肌纤维结构清晰， 着色均匀。脓毒症模型组小鼠心肌肌丝多数断裂，排列紊乱，结构明显被破坏。 中、高浓度葸贝素治疗组与脓毒症模型组相比，肌丝断裂情况明显好转，心肌纤 维结构更为清晰。 3、免疫组化检测心肌细胞PPAR-y蛋白的表达结果 空白对照组PPAR吖蛋白表达较少。与正常对照组相比，脓毒症模型组PPAg-v 蛋白表达无明显差异。中、高浓度葸贝素治疗组PPAR吖蛋白表达同样明显增加， 表现为在心肌组织的细胞胞浆及胞核中只见少量棕黄色颗粒。 丌T 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 4、免疫组化检测心肌细胞TNF．Q蛋白的表达结果 空白对照组TNF一0c几乎只有少量表达，心肌组织中未见明显的棕黄色颗粒，脓 毒症模型组中n师．Q表达明显，表现为在心肌组织的细胞胞浆及胞核中可见大量棕 黄色颗粒。与脓毒症模型组相比，中、高浓度葸贝素治疗组TNF．0c蛋白表达明显减 少， 5、western blot测定小鼠心脏细胞核NF—KB蛋白表达 Western blot检测显示，在正常对照组小鼠心肌组织中细胞核内NF—r,B有少量 表达。小鼠注射LPS 6h后，心肌细胞核内NF。rd3蛋白水平明显增高。低浓度葸贝 素治疗组小鼠心肌细胞核内NF—r．B蛋白水平与脓毒症模型小鼠并无明显差异。而 中、高浓度葸贝素治疗组小鼠心肌细胞核内NF．rd3蛋白水平低于脓毒症模型小鼠。 结论： 蒽贝素可浓度依赖性对抗脓毒症小鼠心肌损伤，其作用机制可能通过上调 PPARy蛋白表达，抑制心肌NF．r,B活化，减少TNF．Ⅸ等炎症因子等实现的。 关键词： 脓毒症，葸贝