tbp化学萃取法去细胞同种异体肌腱制备方法的实验研究外科学专业论文.docxVIP

目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 4 研究论文TBP化学萃取法去细胞同种异体肌腱制备方法的实验研究 前言····一·日U吾“一一“”“ “““““““”””“““””””一“．． ””“一一··” “”” ”“““””””。y“““” ·9 材料与方法 9 结果············· ·· ·· ······· ··一··O O ““”13 附图 16 附表 O D 25 讨{仑“ ”””””“” ””“““”””“““”””一”“一“”·Q 26 结{念一”””“”“””””””””一·OIO“一 ””“””“”””一“一”30 参考文献 30 综述组织工程异体肌腱移植的研究进展 O 33 致谢······ ················ ······· ·····一·····一·一········ 一··“”““47 个人简历 48 中文摘要IBP化学萃取法去细胞同种异体肌腱制备方法的实验研究 中文摘要 IBP化学萃取法去细胞同种异体肌腱制备方法的实验研究 摘 要 目的：肌腱损伤是手外科中的多发损伤，肌腱缺损的修复是手外科 临床常见病之一，常用的修复方法是自体肌腱移植、转位、延长及自体筋 膜替代缺损肌腱，但自体肌腱来源有限，多条肌腱缺损的治疗仍是临床上 一个亟待解决的难题。随着同种异体肌腱的研究制备，为肌腱缺损的治疗 开创了一条新的途径；同种异体肌腱来源充足、取材方便、手术时间短， 减少患者新的损伤及供区的功能影响。但是同种异体肌腱移植后发生的粘 连问题一直是困扰临床广泛应用的最大难题。肌腱是一个少血供、少细胞 的组织，有相对较低的抗原性。胶原并不表现抗原性，肌腱的抗原性主要 存在于其腱细胞成分，主要是组织相容性抗原(HLA)。本课题采用TBP化 学萃取法去细胞同种异体肌腱，制备出肌腱细胞去除完全，肌腱的生物力 学无改变的去细胞同种异体肌腱移植物，从而更好的去除同种异体肌腱的 免疫原性，防止肌腱外源性愈合，促进肌腱内源性愈合，减轻移植后的肌 腱的粘连。 方法：选用3个月龄健康雄性白色Leghorn鸡48只，平均1．9±0．053Kg。 随机分为A、B、C三组，A组为TBP化学萃取法组、B组为深低温冷冻处理组，C 组为空白对照组。本实验选用Lenghorn鸡双足第三趾为实验模型趾。取足 趾掌侧纵行切口，长约lOcm，切开皮肤后沿跖侧腱鞘浅层锐性分离，向侧 方翻起皮瓣，暴露跖侧腱鞘，沿腱鞘正中纵行切开，长约lOcm，于趾间 关节伸直位趾深屈肌腱止点处横断趾深屈肌腱，分别将长、短腱纽于肌腱 连接处离断，勿损伤肌腱端，向近端延长切口，仔细分离腱联合，游离出 第三趾屈趾深肌腱，将其于小腿间关节部离断。取出肌腱，生理盐水漂洗， 去除肌腱外膜。A组肌腱：40ml Tris缓冲溶液，PH=8．0，包括5mM EDTA， 1％(v／v)TBP浸泡肌腱48d,时，每24小时更换一次液体。再用40ml中性液体 漂洗24dx时，70％乙醇冲洗24d,时(上述步骤均在振荡器上室温下进行)。 肌腱保存在保温箱(37℃，5％c0：)和组织培养基中，包括10％胎牛血清， 1％HEPES(羟乙基哌嗪乙磺酸)，1％谷氨酰胺，0．4％艮他霉素，盘尼西林 G200U／ml，链霉素200ug／ml，两性霉素BO．5ug／ml，备用；B组肌腱：浸泡 中文摘要于MEM液(含10％甘油)10—15分钟，无菌容器封装，贴标签记录取材日期、 中文摘要 于MEM液(含10％甘油)10—15分钟，无菌容器封装，贴标签记录取材日期、 肌腱类型等项目，置于可控深低温冰箱内，逐步降温至--80℃，lOd后测 试；C组肌腱为空白对照组。对进行上述处理的三组肌腱分别行①形态组 织学观察：分别在大体、HE染色及电镜三方面进行形态学观察分析；②生 物力学测试：用Tytron一250生物力学试验机对三组肌腱分别行肌腱最大拉 伸断裂强度(Pmax)，肌腱最大拉伸断裂功耗(Wmax)，及肌腱拉伸断裂延伸 率(6 max)测定。③混合淋巴细胞培养测定：用含O．2％胶原酶RPM I 1640 液分别消化切碎的A、B、C组肌腱，分离获取细胞成分，调节浓度为1× 。106／ml，作为刺激细胞：同时采取受体鸡静脉血，用淋巴细胞分离液分离获 取淋巴细胞，调节浓度为1×106／ml作为反应细胞．将刺激细胞分别等量与 反应细胞混合培养，各组做3个复孔，混合培养5天后，吸取细胞悬液离心取 沉淀制推片，瑞姬氏染色，光镜下计总淋巴细胞数(约500个)及转化细胞数， 计算转化率如下：淋巴细胞转化率=转化细胞数／淋巴细胞总数×100％。计 算各组3个复孔转化率均值，作为此组转化率．分别取10只供体鸡趾屈腱及 10只受体鸡静脉血试验。所有统计结果采用方差分析。 结果：①形态组织学观察：大体上：化学萃取法