猪丹毒杆菌的分离鉴定及药敏测定.PDF

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　２０１６（０５下）：１３３－１３４ 猪丹毒杆菌的分离鉴定及药敏测定 刘素梅 （廊坊职业技术学院，河北 廊坊０６５０００） 中图分类号：Ｓ８５５ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００４－７０３４（２０１６）０５－０１３３－０２ 　　猪丹毒是由胞内菌———猪丹毒杆菌感染引起猪 １．５　试验动物 的一种急性热性传染病，俗称“打火印”，广泛流行于 ２０日龄健康小白鼠８只，体重２０～２５ｇ，雌雄各 世界各地，对养猪业危害很大。急性型呈败血症，亚 半，购自某养殖场。 急性型在皮肤上出现紫红色疹块，慢性型则主要发生 ２　方法 心内膜炎和关节炎。目前该病虽然在集约化的猪场 ２．１　细菌的分离纯化 中比较少见，但整体疫情仍未完全控制。 无菌采取疑似猪丹毒病死猪的肝脏、肺脏、心血， ２０１４年廊坊地区某养猪场发生了一起以皮肤出 分离细菌，划线接种于血液琼脂平板上，３７℃恒温培 现疹块并伴有急性败血性死亡为症状的传染病，初步 养２４ｈ进行细菌分离，选取优势生长的菌落移接于 怀疑为猪丹毒，且调查得知该养殖场有过猪丹毒病 马丁肉汤培养基斜面和普通营养肉汤做纯培养，供鉴 史，经过分离鉴定得到确诊，现将病原的诊断过程及 定用。 药敏试验结果报道如下。 ２．２　细菌形态学和培养特性观察 １　材料 无菌挑取上述纯培养菌，移接于营养肉汤培养基 １．１　菌株来源 斜面，３７℃培养１８ｈ后涂片，经革兰氏染色镜检。再 无菌取疑似猪丹毒病死猪的心脏、肝脏、脾脏、皮 取上述纯培养物分别划线接种于普通琼脂培养基、马 肤疹块液、关节液、淋巴结、肺脏等，进行细菌分离、纯 丁肉汤培养基、血液琼脂平板中，３７℃培养２４ｈ后观 化培养，得到一株试验菌株。 察其生长情况。 １．２　主要试剂 ２．３　生化试验 用移液枪取上述纯培养的马丁肉汤菌液３０ Ｌ， 血液琼脂培养基、普通营养琼脂培养基、Ｍ．Ｈ．琼 μ 脂培养基、马丁肉汤，购自北京路桥技术有限责任公 分别接种于各种生化培养基上，如糖发酵试验（葡萄 司；各种生化试剂均按常规方法制备。 糖、蔗糖、乳糖等）、甲基红试验、吲哚试验、氧化酶试 １．３　主要器材 验、硫化氢试验和明胶液化试验，观察结果。 双人单面净化工作台（型号为ＳＷ－ＣＪ－２ＦＤ）， ２．４　动物感染试验 苏州净化设备有限公司产品；电热恒温培养箱 （型号 取健康小白鼠８只，随机分成２组（保证其饮食、 为ＨＰＸ－９１６２ＭＢＥ），上海博迅实业有限公司产品； 垫料无菌）。试验组小白鼠皮下接种该菌的马丁肉 电子分析天平（型号为ＦＡ２００４Ｂ），上海精密科学仪 汤培养液，剂量为０．２ｍＬ／只；对照组小白鼠注射等 器有限公司产品；高速离心机（型号为ＴＧＬ－１６Ｇ）， 量无菌的马丁肉汤培养液。注射后７２ｈ内观察小白 上海安亭科学仪器厂产品；生物显微镜（型号为 鼠死亡情况，并对死亡小白鼠进行剖检，观察其病变； ＳＦＣ－１８ＳＥＲＩＥＳ），北京麦克奥迪仪器公司产品；冰 无菌操作取其心血、肺脏、肝脏，涂片、染色、镜检，同 箱，青岛利勃海尔设备有限公司产品。