肝细胞生长因子浓度对人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响心血管外科专业论文.docxVIP

郑 郑 州 大 学 2 00 9 届 硕 士 研 究 生 学 位 论 文 摘 要 分 组 : 取 第 3 代 传 代 细 胞 ，分 为 6 组 : ① 一 ⑤ 组 为 实 验 组 ，分 别 加 入 3 林留L 、 5 林留L 、 10 林g/L 、 2 0 林留L 和 4 0 林g/L H G F ， 连 续 培 养 4 w ， 每 3 d 换 液 l 次 ; ⑥ 组 为 阴 性 对 照 组 ， 不 加 入 H G F ， 其 余 条 件 与 实 验 组 相 同 。 结 果 判 定 : 所 有 分 组 均 在 显 微 镜 下 连 续 观 察 诱 导 细 胞 的 形 态 变 化 ，并 详 细 记 录 ; 再 于 第 四 周 行 免 疫 细 胞 化 学 染 色 鉴 定 心 肌 特 异 性 肌 钙 蛋 白 I (cT nl ) 及 心 肌 特 征 性 蛋 白缝 隙 连 接 蛋 白 43 ( c x 43 ) 的 表 达 ，胞 浆 内 出 现 棕 黄 色 颗 粒 为 阳 性 细 胞 ， 用 cT nl 阳 性 细 胞 所 占 比例 计 算 转 化 率 。 统 计 学 方 法 : 运 用 S P S sl 3 .O 统 计 学 软 件 ， 多 个 样 本 均 数 的 比 较 采 用 K rusk al一W allis H 检 验 (H 检 验 )， 组 Ibj t匕较 采 用 Stu d en t一N ew m an 一K eu ls 检 验 ， 取 a = 0.05 为 检 验 水 准 。 结 果 1 . 显 微 镜 下 连 续 观 察 结 果 : 经 H G F 诱 导 的 各 实 验 组 h M S C S 均 出 现 不 同 程 度 的 增 殖 ，诱 导 7 d 后 h M S C s 的 形 态 即 发 生 明 显 改 变 ，细 胞 紧 密 生 长 ，体 积 明 显 增 大 ，纺 锤 形 细 胞 比 例 下 降 ，多 为 卵 圆 形 或 柱 状 细 胞 ，相 邻 细 胞 间 有 接 触 。2 周 后 细 胞 之 间 连 接 愈 加 紧 密 。3 一 4 周 后 ，细 胞 增 殖 速 度 减 慢 ， 相 邻 细 胞 间 逐 渐 相 连 呈 肌 管 状 ， 细 胞 核 /胞 浆 比 例 明 显 降 低 ， 胞 浆 内 有 细 小 的 颗 粒 样 结 构 ，且 颗 粒 样 结 构 多 聚 集 于 细 胞 核 周 围 。阴 性 对 照 组 h M S C s 无 任 何 明 显 改 变 。 2 . 实 验 4 周 后 ， 用 免 疫 组 化 法 鉴 定 cT nl 、 C x 43 : 在 阴 性 对 照 组 上 述 两 蛋 白 均 呈 阴 性 表 达 ，而 在 经 H G F 作 用 后 的 5 个 实 验 组 中 均 有 一 定 的 阳 性 表 达 。 其 中 ， eT n l 阳 性 细 胞 百 分 率 ( % ) : 3 林g /L 组 为 ( 14 .2 4 士0 .4 6 0，0 ) 、 5 林g/L 组 为 ( 2 5 .3 2 士1 .4 1% ) 、 一。协g/L 组 为 ( 3 8 .4 6士1 .4 1% ) 、 2 0 协g/L 组 为 ( 27 .3 8 士1 .32 % ) 、40 林留L 组 为 ( 2 0 .3 6士2 .15 % ) ，统 计 学 分 析 各 组 之 间 差 异 具 有 统 计 学 意 义 (P 0.05 ) ， 且 以 10 林留L 组 最 高 。 结 论 1. h M S C s 经 H G F 诱 导 后 的 细 胞 间 有 肌 管 样 结 构 形 成 ， 且 存 在 e T n l 、 C x 4 3 的 阳 性 表 达 ， 出 现 可 鉴 定 为 心 肌 细 胞 的 特 异 性 免 疫 组 化 表 现 ， 提 示 H G F 在 体 外 能 够 诱 导 h M S C S 向 心 肌 细 胞 转 化 。 1 1 1 郑 郑 州 大 学 2 00 9 届 硕 士 研 究 生 学 位 论 文 摘 要 2 . 不 同 浓 度 H G F 诱 导 的 hM s c s 转 化 心 肌 细 胞 百 分 率 不 同 ， 而 10 林留L H G F 诱 导 组 相 对 转 化 率 最 高 ， 提 示 H G F 的 浓 度 对 其 诱 导 效 果 有 影 响 ， 且 其 最 佳 诱 导 浓 度 可 能 为 1即 岁L 。 关 键 词 人 ; 骨 髓 间 充 质 干 细 胞 ; 心 肌 细 胞 ; 肝 细 胞 生 长 因 子 ; 细 胞 培 养 ; 免 疫 组 织 化 学 法 郑 州