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益元宁肝胶囊质量标准研究 　　【摘 要】 目的：建立益元宁肝胶囊的质量控制方法。方法：采用TLC法鉴别方中的山茱萸和丹参，采用HPLC法测定马钱苷的含量。结果：在TLC色谱中可检出山茱萸、丹参的特征斑点；马钱苷在～μg ，平均回收率为%。结论：所建立的方法能够准确可靠地进行定性、定量检测，重复性好，适用于益元宁肝胶囊的质量控制。　　【关键词】 益元宁肝胶囊；马钱苷；山茱萸；高效液相色谱法　　益元宁肝胶囊为濮阳市某医院协定处方，由菟丝子、山茱萸、黄芪、灵芝、丹参、肉苁蓉、贯众等药组成，具有解毒护肝、益气健脾、调节免疫的功效，用于急慢性肝炎、肝炎病毒携带者。本品临床疗效肯定，但原质量标准较简单，不能准确地把握产品内在质量。本实验采用薄层色谱法对方中的山茱萸和丹参进行了薄层鉴别，采用高效液相色谱法测定山茱萸中的马钱苷的含量[1]，建立了简便可行、准确可靠的质量控制标准和检验方法。　　1 仪器与试药　　Agilent 1260高效液相色谱仪，配有四元梯度泵和Agilent chenstation数据工作站；artorius CPA 225D分析天平，编号：。熊果酸对照品，丹参酮ⅡA对照品，马钱苷，均购自中国药品生物制品检定所。益元宁肝胶囊及阴性对照品自制均由濮阳市某医疗机构提供；乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其他试剂为分析纯。　　2 方法与结果　　 薄层鉴别　　 山茱萸的薄层鉴别 取本品内容物5g，倾取内容物，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流2h，提取液回收乙醚至干，残渣加无水乙醇-氯仿混合液1ml微热使溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每毫升含的对照品溶液。按照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-氯仿-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。阴性对照无相应斑点。　　 丹参的薄层鉴别 取本品内容物5g，倾取内容物，加氯仿50ml，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参酮ⅡA对照品，加乙醇制成每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；阴性对照无相应斑点。　　图1 山茱萸薄层鉴别 图2 丹参薄层鉴别　　 马钱苷的含量测定[2]　　 色谱条件 色谱柱： Venusil MP C18柱；流动相：乙腈一―水为流动相；流速为/min。柱温30℃，检测波长为238，理论塔板数大于 3000。在此条件下，马钱苷与相邻组分均能达到完全分离。　　 对照品溶液的制备 分别精密称取马钱苷对照品，加80%甲醇制成浓度为/ml的溶液，作为对照品储备溶液，备用。取上述对照品储备溶液2ml至10ml量瓶中，加80%甲醇至刻度。即得每毫升含马钱苷的对照品溶液[3]。　　 供试品溶液的制备 取本品内容物研细，取约，精密称定，置烧瓶中，精密加入80%甲醇25ml，称定重量，加热回流1h，放冷，用80%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。阴性对照品溶液的制备：另取不含山茱萸药材的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。　　 测定方法 分别吸取对照品溶液、样品溶液和阴性对照品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，以外标法分别计算马钱苷的含量。　　 阴性对照品的测定 取不含山茱萸药材的阴性样品，按“”项下方法操作，得阴性对照溶液。依法测定，结果表明阴性液无干扰。　　 方法学考察　　 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液各5、10、15、20、25μl，按上述色谱条件进行测定，以进样量为横坐标、色谱峰面积为纵坐标分别作线性回归。表明马钱苷在～μg 范围内线性关系良好。　　A.对照品；B.益元宁肝胶囊样品； C.阴性对照品； 1.马钱苷。　　图3 益元宁肝胶囊HPLC　　 精密度试验 精密吸供试品溶液10μl，重复进样6次，分别记录马钱苷峰面积。结果马钱苷峰面积的RSD为%，表明仪器精密度良好。　　 稳定性试验 将供试品溶液分别在制备后 0、1、2、4、8、12h时进样测定。结果马钱苷峰面积的RSD为%，表明12h内样测定，样品稳定性良好。　　 重复性试验 精密称取同批号的样品，按供试品溶液的制备方法制备6份样品溶液，依法测定。分别计算含量和RSD，结果马钱苷平均含量为/g， RSD为%。　　 加样回收试验 采用加样回收法，精密称取样品6份，每份约，分别加入对照品备用液3ml，按照供