利用基因工程改善D-阿洛酮糖表异构酶并生产D-阿洛酮糖.PDFVIP

利用基因工程改善D-阿洛酮糖表异构酶并生产D-阿洛酮糖.PDF

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1 利用基因工程改善 -阿洛酮糖表異構酶並生產 -阿洛酮糖 D D 2 張哲源 (5109) 3 10/14/2015 4 大綱 5 一、前言 6 二、利用隨機與定位突變提昇源自 Agrobacterium tumefaciens 之 -阿洛酮糖表 D 7 異構酶的熱穩定性 8 三、共表現 葡萄糖異構酶與- -阿洛酮糖表異構酶生產 -阿洛酮糖 D D D 9 四、固定 -木糖異構酶和 -阿洛酮糖表異構酶於 Saccharomyces cerevisiae 孢 D D 10 子以生產 -阿洛酮糖 D 11 五、結論 12 摘要 13 -阿洛酮糖 ( -psicose) ,可做為蔗糖的替代物,為一種稀有醣類。在醫學上 D D 14 具多種應用。近年來,有研究利用 -阿洛酮糖表異構酶 ( -psicose 3-epimerase, D D 15 DPE) 將價格低廉之 -果糖轉換為 -阿洛酮糖 (Choi et al., 2011) 。源自 D D 16 Agrobacterium tumefaciens 之 DPE 利用隨機與定位突變得到熱穩定性較高之 o o 17 I33L S213C 雙突變酵素 ,其最適作用溫度提昇7.5 C ,55 C的半衰期為原生型 18 酵素的 2.6 倍,以填充床反應器反應 30 天,添加與未添加硼酸鹽的轉換率分別 19 為 22% 和 9% ,雙突變 DPE 反應 30 天後,酵素活性不變,適合長時間生產。 20 將 Bacillus sp. 來源之 -葡萄糖異構酶 ( -glucose isomerase) 與源自 D D 21 Ruminococcus sp. 之 DPE 以 E. coli BL21 (DE3) 進行共表現,其最適反應條件 o 2+ 22 為 65 C 、pH 值 7 ,添加Mg 可提昇 2.32 倍 共表現酵素活性,共表現酵素以 23 1% D葡萄糖為基質反應,平衡後,- 得到 1.6 g/L D-阿洛酮糖,以高果糖玉米糖 24 漿 (high-fructose corn syrup, HFCS) 為基質,利用共表現酵素反應 8 小時, -阿 D 25 洛酮糖約占 15% 。將 -木糖異構酶 ( -xylose isomerase, XI) 和 -阿洛酮糖表異 D D D

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