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1 利用基因工程改善 -阿洛酮糖表異構酶並生產 -阿洛酮糖
D D
2 張哲源 (5109)
3 10/14/2015
4 大綱
5 一、前言
6 二、利用隨機與定位突變提昇源自 Agrobacterium tumefaciens 之 -阿洛酮糖表
D
7 異構酶的熱穩定性
8 三、共表現 葡萄糖異構酶與- -阿洛酮糖表異構酶生產 -阿洛酮糖
D D D
9 四、固定 -木糖異構酶和 -阿洛酮糖表異構酶於 Saccharomyces cerevisiae 孢
D D
10 子以生產 -阿洛酮糖
D
11 五、結論
12 摘要
13 -阿洛酮糖 ( -psicose) ,可做為蔗糖的替代物,為一種稀有醣類。在醫學上
D D
14 具多種應用。近年來,有研究利用 -阿洛酮糖表異構酶 ( -psicose 3-epimerase,
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15 DPE) 將價格低廉之 -果糖轉換為 -阿洛酮糖 (Choi et al., 2011) 。源自
D D
16 Agrobacterium tumefaciens 之 DPE 利用隨機與定位突變得到熱穩定性較高之
o o
17 I33L S213C 雙突變酵素 ,其最適作用溫度提昇7.5 C ,55 C的半衰期為原生型
18 酵素的 2.6 倍,以填充床反應器反應 30 天,添加與未添加硼酸鹽的轉換率分別
19 為 22% 和 9% ,雙突變 DPE 反應 30 天後,酵素活性不變,適合長時間生產。
20 將 Bacillus sp. 來源之 -葡萄糖異構酶 ( -glucose isomerase) 與源自
D D
21 Ruminococcus sp. 之 DPE 以 E. coli BL21 (DE3) 進行共表現,其最適反應條件
o 2+
22 為 65 C 、pH 值 7 ,添加Mg 可提昇 2.32 倍 共表現酵素活性,共表現酵素以
23 1% D葡萄糖為基質反應,平衡後,- 得到 1.6 g/L D-阿洛酮糖,以高果糖玉米糖
24 漿 (high-fructose corn syrup, HFCS) 為基質,利用共表現酵素反應 8 小時, -阿
D
25 洛酮糖約占 15% 。將 -木糖異構酶 ( -xylose isomerase, XI) 和 -阿洛酮糖表異
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