医学免疫学与病原生物学融合创新试验.DOCVIP

《医学免疫学与病原生物学融合创新性实验》课程实验教学大纲 课 程 名 称： 医学免疫学与病原生物学实验 英 文 名 称： Medical immunology and Pathogenic Biology Experiment 课 程 编 号： 实 验 课 性 质： 融合创新性实验 课 程 负 责 人：于修平 开放实验项目数： 大 纲 主 撰 人： 周亚滨 齐眉 何深一 郭淑玲 袁方曙 马春红 王晓燕、梁晓红 大 纲 审 核 人： 于修平 一、学时、学分 课程总学时： 实验学时：24 课程总学分： 实验学分： 二、适用专业及年级 供基础、临床、预防、口腔医学、护理学、药学专业用 5、6、7年制 三、实验教学目的与基本要求 通过融合性实验教学，将医学微生物学、人体寄生虫学以及医学免疫学的理论知识和实验技术进行有机整合，培养学生综合运用所学知识解决实际问题的能力，提高学生的综合思维能力和应用能力。同时通过实验教学，使学生学会使用常用的仪器，培养学生动手能力。通过实验设计，培养学生自主科研能力和创新意识。 四、主要仪器设备 超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱、流式细胞仪、酶标仪, 紫外可见分光光度计、PCR扩增仪、医学图像分析系统等。 五、实验课程内容和学时分配 序 号 实验项目 名 称 实 验 内 容 学时分配 实验要求 指 导 教 师 已开/未开 1 小儿腹泻的病原体检测 1．肠道致病菌的微生物学检查：通过分离培养、生化反应等对标本中的可疑致病菌进行鉴定； 2．A组轮状病毒感染的实验室检测：通过ELISA、PCR技术检测标本中轮状病毒的存在情况； 3．肠道腹泻原虫的实验室检查：通过直接涂片、碘液染色、抗酸染色等对标本中的可疑原虫进行检测、鉴定。 8 分小组进行 周 亚 滨 齐 眉 等 已开 2 人体蠕形螨的检查方法 （1）用刮片式取螨器取螨，28-30℃室温条件下，受检者皮肤微汗，毛孔微张为宜，受检者仰头有枕靠，助手将其额部皮肤张紧，检查者手持刮片式取螨器与受检者皮肤成60度角，加压刮取皮脂，用牙签将皮脂剃下。滴一滴液体石蜡于载玻片上，将剃下的皮脂溶于液体石蜡中，用牙签尽量将皮脂块碾碎，搅匀。将制好的标本置于显微镜下，用低倍镜和高倍镜观察。 （2） 用镊取螨器取螨，同样室温条件下，受检者仰头，检查者站其背后，用拇指将被检侧的鼻翼按压推向对侧，充分暴露展平其鼻唇沟，检查者手持镊式取螨器于鼻唇沟处加压镊取皮脂，同样方法将皮脂溶于液体石蜡中，用牙签尽量将皮脂块碾碎，搅匀后，镜检。 4 分小组进行 郭 淑 玲 袁 方 曙 何 深 一 杨 青 已开 3 食用猪肉和淡水鱼的检疫 （1）猪肉压片检查旋毛虫幼虫：用手术镊取猪横纹肌一块（绿豆粒大小）置于两张载玻片之间，用牙签蘸一滴甘油滴在肌肉上，稍用力夹紧两玻片，把肌肉压扁，玻片两端用棉线捆扎，放在低倍镜下检查，注意囊包的形状和囊内幼虫的形状。 （2）猪囊尾蚴压片检查：用镊子从鲜肉中取一粒囊尾蚴，用镊子将囊壁挑破，然后把囊尾蚴夹于两张载玻片之间，用力把虫体压扁，玻片两端用棉线捆扎，放在低倍镜下检查，注意虫头上有无吸盘和小钩。 （3）鱼肉压片检查检查肝吸虫囊蚴：一条或一块鲤科淡水鱼放在洁净的器械盘中，用手术刀和镊子刮去脊背处的鱼鳞，撕去鱼皮，从鱼的背部镊取一小块肌肉（绿豆粒大小；绝大部分囊蚴分布在背部及肛区至尾鳍的基部）放在两张载玻片之间，用力压薄，用棉线扎紧玻片两端，放在低倍镜下检查。囊蚴呈椭圆形，可见囊壁和排泄囊，必要时要与其它吸虫的囊蚴（如猫后睾吸虫等）相区别。 4 分小组进行 袁 方 曙 何 深 一 郭 淑 玲 杨 青 已开 4 卡介苗免疫后对T细胞亚群的影响 1．利用卡介苗给小鼠皮下注射，每周一次，共两次。 2．处死小鼠，取出脾脏，研磨，获得单细胞悬液。 3．利用氯化铵破红细胞，离心获得脾细胞，计数。 4．分别利用荧光标记的CD4和CD8单抗标记脾细胞，在流式细胞仪上检测CD4和CD8阳性T细胞的比例。 4 分小组进行 王 晓 燕 梁 晓 红 朱 法 良 已开 5 肿瘤坏死因子的诱生及活性测定 TNF-a的诱生：（1）将小鼠巨噬细胞种板，常规培养24h；（2）加入LPS刺激，继续培养24h；（3）收集培养上清。 TNF-a活性检测：（1）将