对分别转有mxirt1及osnramp1的转基因酵母进行的蛋白质组及转录本组分析细胞生物学专业论文.docxVIP

首都师范大学硕士学位论文摘要 首都师范大学硕士学位论文 摘要 MxIRTI和OsNrampl分别是从小金海棠和水稻根中克隆得到的金属转运蛋白。异源 功能互补实验证明两种基因均可以互补酵母双突变体fet3fet4中铁的吸收。本研究从蛋 白质组和转录本组两个水平对基因及其引起的变化进行研究。 研究的第一部分利用蛋白质双向电泳及肽质量指纹谱技术分别对过铁及缺铁条件下 的转IRT菌株、正常铁处理条件下的转Nramp及转空载体菌株、正常铁处理及缺铁处理条 件下分别转有空载体、IRT及Nramp的酵母菌株进行了蛋白质组分析。通过蛋白质双向电 泳技术每种处理条件下的酵母菌株均可分离得到1500个左右的蛋白点。其中对过铁及缺 铁条件下的转／RT菌株检索得到8个差异蛋白，分别与细胞骨架、分子伴侣、氨基酸合成， 甘油合成等相关；正常铁处理条件下的转Nramp及转空载体菌株中检索得到9个差异蛋白， 分别与分子伴侣、糖代谢、亚精胺合成、抗氧化作用等相关；对正常铁处理及缺铁处理条 件下分别转有空载体、IRT及Nramp的酵母菌株检索得到11个差异蛋白，除1个为功能 未知蛋白外，其它lO个差异分别是与糖代谢、蛋白质的生物合成、细胞抗毒害、膜泡运 输及信号转导相关的蛋白。 研究的第二部分利用基因芯片技术对正常铁处理条件下分别转有空载体、IRT及 Nramp的酵母菌株进行了转录本组分析。提取酵母总RNA，通过反转录标记生物素，进行 酵母10928个eDNA的芯片杂交。其中，转IRT菌株相对于转空载体菌株上调表达的基因 为1200个，下调表达的基因为1140个；转Nramp菌株相对于转空载体菌株上调表达的基 因为290个。下调表达的基因为108个。对转Nramp菌株中差异性较为显著的27个上调 表达基因和45个下调表达基因进行分析发现，上调表达基因多为与锌指结构相关、与RNA 结合、调节子或抑制子和高渗诱导表达基因，下调表达基因多为与膜泡运输、细胞通讯、 细胞周期和蛋白质的合成相关。 推测在转基因酵母中，由于IRT或是Nramp的转入，单基因多效作用比较明显．除了 DNA复制、RNA转录、蛋白质合成、氧化呼吸作用等效应有明显的变化外，转录因子、 分子伴侣有特异的分子构型变化，膜泡运输相关的基因变化也诱导转基因酵母菌株对铁浓 度变化的响应。 关键字：MxlRTl，OsNrampl，蛋白双向电泳，肽质量指纹谱，基因芯片，膜泡运输 蔓塑堕蔓盔兰堡主兰堡堡苎Abstract 蔓塑堕蔓盔兰堡主兰堡堡苎 Abstract MxlRTl and OsNrampI Were metal transporters cloned from M．xiaojinensis Cheng et Jiang and rice roots respectively under iron-deficient conditions．Both of MxIRTl and OsNrampl can complement iron uptake activity of Saccharoomyces cerevisiae mutant strain DEYl453 OCet3fet4)．This work is aimed to research the pathway induced by the two genes in the level ofproteome and transeriptome maps． Part one：Protenme analysis of transformed yeast wilh／RT cultured under iron—sufficient and iron-deficient conditions，transformed yeast with Nramp and empty-vector cultured under normal condition．transformed yeast with腰几Nramp and empty-vector under the normal or iron-deficient conditions．Using 2-DE technique more than 1500 spots were isolated per gel． After the in-gel digest and MALDI-TOF—MS，8，9 and 1 1 proteins with difference wtlre identified respectively under the Mascot research．Most of the proteins were associated with the cytoskeleton,chaperone